大豆小片段法HRM基因分型体系优化

作     者：王艳 赵雪 姜振峰 张东雪 韩英鹏 滕卫丽 李文滨 WANG Yan;ZHAO Xue;JIANG Zhen-feng;ZHANG Dong-xue;HAN Ying-peng;TENG Wei-li;LI Wen-bin

作者机构：东北农业大学/大豆生物学教育部重点实验室/农业部东北大豆生物学与遗传育种重点实验室黑龙江哈尔滨150030 

基　　金：国家大豆遗传改良工程项目(2015ZX08004) 国家科技部支撑计划(2014BAD22B00) 国家863计划(2012AA101106-1-9 2013AA102602-3) 国家自然科学基金(31201227 31301339) 国家"十二五"科技支撑计划(2011BAD35B06 2014BAD22B00) 现代农业农业部大豆产业技术体系(CARS-04-PS04) 中国博士后项目(20110491024) 黑龙江省博士后项目(LBH11220 LBH-TZ1210) 教育部博士点项目(20122325120012) 大豆生物学省部共建创新团队计划 

出 版 物：《中国油料作物学报》 (Chinese Journal of Oil Crop Sciences)

年 卷 期：2015年第37卷第4期

页      码：453-461页

摘      要：应用高分辨率熔解曲线（high resolution melting curve,HRM）技术进行基因分型简单有效,灵敏度高、特异性强。优化并建立基于HRM的大豆SNP基因分型体系,是准确进行SNP研究的前提和基础。本研究利用添加内标后的小片段法进行SNP基因分型体系优化研究,结果表明在设计SNP引物时,最好使其PCR产物长度为50～80bp,熔解温度在72～82℃,Tm值介于55～62℃之间;10μLPCR反应体系中应包含25ngDNA模板,0.6pmolSNP引物,1μLLCGreen染料;PCR反应后,应在各点样孔分别加入3pmol的高、低温内标,然后进行变性处理和HRM分析。同时利用建立的基因分型体系对重组自交系群体（RIL）进行了基因分型检测,能完全将其分成亲本的两种基因型,提高了SNP基因分型的准确性和效率。本研究建立的SNP基因分型体系为今后进行大豆SNP标记开发、高密度遗传图谱构建、QTL定位等研究提供了基础。

主 题 词：大豆 SNP HRM 基因分型 小片段法 

学科分类：09[农学] 0901[农学-植物生产类] 

核心收录：

D　O　I：10.7505/j.issn.1007-9084.2015.04.004

馆 藏 号：203265838...