人TBK1小干扰RNA质粒的构建及稳定干扰TBK1细胞株的筛选

作     者：孙静 魏从文 管楷 程孝中 徐扬 袁媛 尹晴晴 宋婷 郑子瑞 张艳红 钟辉 SUN Jing;WEI Cong-Wen;GUAN Kai;CHENG Xiao-Zhong;XU Yang;YUAN Yuan;YIN Qing-Qing;SONG Ting;ZHENG Zi-Rui;ZHANG Yan-Hong;ZHONG Hui

作者机构：军事医学科学院生物工程研究所北京100850 北京市公安医院北京100121 安徽大学生命科学院安徽合肥230039 吉林大学分子酶学工程实验室吉林长春130012 

出 版 物：《生物技术通讯》 (Letters in Biotechnology)

年 卷 期：2010年第21卷第2期

页      码：163-167页

摘      要：目的:构建人TANK结合激酶1(TBK1)的小干扰RNA真核表达质粒,并筛选出稳定干扰TBK1的细胞株。方法:根据文献报道的序列和载体的黏性末端,设计合成2条针对TBK1的DNA序列,退火后连接到载体***+gfp上,经测序分析正确后得到质粒psiTBK1。用脂质体转染质粒psiTBK1到MCF-7细胞中,经G418加压筛选稳定表达TBK1小干扰RNA的细胞株,用免疫印迹检测细胞中TBK1的表达情况,将干扰效果好的细胞株命名为MCF-7/siTBK1,再用萤光素酶试验检测MCF-7/siTBK1细胞对外源TBK1诱导干扰素-β(IFN-β)转录的情况。结果:免疫印迹结果证实建立的稳定细胞株MCF-7/siTBK1能够有效干扰TBK1的表达,并在外源TBK1存在的情况下抑制IFN-β的转录活性。结论:构建了表达TBK1小干扰RNA的质粒psiTBK1,筛选出稳定干扰TBK1表达的细胞株MCF-7/siTBK1,为深入研究TBK1在先天免疫中的作用提供了平台。

主 题 词：TANK结合激酶1 小干扰RNA 萤光素酶试验 转录活性 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1009-0002.2010.02.004

馆 藏 号：203271807...