多药耐药相关蛋白4对脂多糖诱导的内皮细胞通透性及细胞骨架的影响

作     者：夏文芳 郑颜磊 周青山 苏镔 张桓铭 Xia Wenfang;Zheng Yanlei;Zhou Qingshan;Su Bin;Zhang Huanming

作者机构：武汉大学人民医院重症医学科武汉430060 

基　　金：国家自然科学基金(81301620 81671941) 

出 版 物：《中华急诊医学杂志》 (Chinese Journal of Emergency Medicine)

年 卷 期：2017年第26卷第9期

页      码：1032-1036页

摘      要：目的探讨多药耐药相关蛋白4（MRP4）对脂多糖（LPS）诱导的大鼠肺微血管内皮细胞（PMVECs）通透性及细胞骨架的影响。方法PMVECs细胞株培养3至6代后随机分为4组，对照组（细胞不做任何处理）、LPS组（细胞仅接受LPS刺激）、shMRP4重组腺病毒组（Ad—shMRP4，将针对大鼠MRP4基因设计的短发夹RNA构建腺病毒载体上，通过腺病毒感染细胞＋LPS刺激）、shRNA重组腺病毒组（Ad—shRNA，带绿色荧光蛋白基因空白的重组腺病毒载体感染细胞＋LPS刺激）。通过荧光显微镜观察细胞感染率，Western botting检测MRPg的表达水平，Transwell小室法检测单层细胞通透性，激光共聚焦显微镜观察细胞内纤维肌动蛋白（F—actin）形态及分布情况。多组间差异采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD—t检验，以P〈0．05为差异有统计学意义。结果与对照组比较，LPS组及Ad—shRNA组MRP4的表达水平显著上调（P〈0．05）、单层细胞通透性显著增加（2、6、12、24h分别为：0．28±0．02和0．41±0．04、0．32±0．02；0．30±0．01和0．53±0．04、0．39±0．03；0．33±0．04和1．12±0．17、0．70±0．07；0．32±0．03和0．79±0．02、0．57±0．05，P〈0．05），F-actin分布紊乱、重构以及应力纤维形成。与LPS组比较，***4组MRP4的表达水平明显下调（P〈0．05）、单层细胞通透性明显降低（2、6、12、24h分别为：0．41±0．04和0．32±0．02；0．53±0.04和0．39±0．03；1．12±0．17和0．70±0.07；0．79±0．02和0．57±0．05，P〈0．05），F-actin重构以及应力纤维形成显著减少。结论MRP4基因沉默显著增减轻LPS诱导的内皮细胞通透性增高及细胞骨架破坏，对内皮细胞屏障发挥保护作用。

主 题 词：脓毒症 多药耐药相关蛋白4 内皮通透性 细胞骨架 基因沉默 

学科分类：100218[100218] 1002[医学-临床医学类] 1010[医学-医学技术类] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2017.09.011

馆 藏 号：203274851...