利迪链霉菌nsdA基因的克隆及其阻断载体的构建

作     者：石玲玲 吴慧玲 刘铭 董丹 卢彩鸽 刘伟成 Lingling Shi;Huiling Wu;Ming Liu;Dan Dong;Caige Lu;Weicheng Liu

作者机构：北京市农林科学院植物保护环境保护研究所北京100097 

基　　金：北京市自然科学基金项目("利迪链霉菌A02 nsdA基因的阻断及其对纳他霉素生物合成调控效应的分析" No.6152007) 北京市科技计划项目("生物农药菌种鉴定与质量检测服务平台建设" No.D151100003915003) 北京市农林科学院科技创新能力建设专项("多粘类芽孢杆菌T99高效菌剂研制" No.KJCX20170410) 

出 版 物：《生物技术》 (Biotechnology)

年 卷 期：2017年第27卷第5期

页      码：409-414,433页

摘      要：[目的]构建nsdA基因的敲除载体和表达载体,获得阳性转化子。[方法]根据GenBank中报道的天蓝色链霉菌nsdA基因序列设计引物,在利迪链霉菌产纳他霉素菌株A01、A02和G117中扩增到预期目的片段,进一步克隆nsdA基因全长序列;经BLAST比对,其核苷酸序列及其编码蛋白的氨基酸序列与天蓝色链霉菌均有较高同源性,据此判断利迪链霉菌A01、A02、G117中含有nsdA基因;进一步构建nsdA基因的敲除载体pLM103和表达载体pIBN139,转入大肠杆菌ET12567(puz8002)。[结果]nsdA基因全长序列1 407 bp,编码468个氨基酸,构建了nsdA基因的敲除载体pLM103和表达载体pIBN139。[结论]成功构建nsdA基因的敲除载体pLM103和表达载体pIBN139,并获得阳性转化子,为后续构建利迪链霉菌nsdA基因阻断突变株,以进一步探究nsdA基因在利迪链霉菌纳他霉素生物合成中的调控作用奠定了基础。

主 题 词：利迪链霉菌 nsdA基因 基因克隆 敲除 遗传转化 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 071007[071007] 

D　O　I：10.16519/j.cnki.1004-31lx.2017.05.0065

馆 藏 号：203277807...