同时监测8种牛常见病原体的GeXP高通量快速检测技术

作     者：范晴 谢芝勋 谢志勤 谢丽基 黄莉 黄娇玲 张艳芳 曾婷婷 王盛 罗思思 邓显文 刘加波 庞耀珊 FAN Qing XIE Zhi-xun XIE Zhi-qin XIE Li-ji HUANG Li HUANG Jiao-ling ZHANG Yan-fang ZENG Ting-ting WANG Sheng LUO Si-si DENG Xian-wen LIU Jia-bo PANG Yao-shan

作者机构：广西兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室南宁530001 

基　　金：广西自然科学基金(2016GXNSFCA380003 2014GXNSFBA118105) 桂科(AB16380003) 

出 版 物：《畜牧兽医学报》 (ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA)

年 卷 期：2017年第48卷第10期

页      码：1920-1931页

摘      要：本研究旨在建立一种可同时检测8种常见牛传染病病原体(口蹄疫病毒、蓝舌病病毒、水疱性口炎病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛轮状病毒、产肠毒大肠杆菌、牛传染性鼻气管炎病毒和小反刍兽疫病毒)的GeXP高通量快速检测方法。将多重PCR技术和毛细管电泳技术有效地结合,根据上述8种病原体的基因保守序列,设计并合成了8对特异性引物,在每对特异性引物的5′端加上一段通用引物,形成特异性嵌合引物。优化反应体系和反应条件,用单一病毒和混合病毒样品来验证所建立的GeXP方法的特异性,用克隆质粒稀释液来测试GeXP方法的灵敏度,检测305份临床样品,进一步验证该方法的可靠性。结果:优化后的GeXP检测体系,可扩增出各病原体对应的特异片段,能在100拷贝·μL^(-1)水平同时并特异地检测出8种牛病病原体核酸。305份临床样品的检测结果与荧光PCR检测结果一致,阳性样品测序结果表明无非特异性扩增的假阳性。结果显示,所建立的GeXP方法具有高通量、特异性好、灵敏度高、方便快速等优点,可用于临床鉴别诊断和流行病学调查,具有较高的临床应用价值。

主 题 词：牛传染病 GeXP 高通量检测 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.11843/j.issn.0366-6964.2017.10.015

馆 藏 号：203277883...