siRNA沉默HepG-2细胞B7-H3对细胞行为学影响的研究

作     者：左佳蕙 张喆 龙敏 郜赵伟 刘冲 董轲 张惠中 Zuo Jiahui;Zhang Zhe;Long Min;Gao Zhaowei;Liu Chong;Dong Ke;Zhang Huizhong

作者机构：第四军医大学唐都医院临床实验与检验科陕西西安710038 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(编号:81572974) 陕西省科技统筹创新工程计划项目(编号:2016KTZDSF01-07) 

出 版 物：《现代肿瘤医学》 (Journal of Modern Oncology)

年 卷 期：2017年第25卷第21期

页      码：3379-3383页

摘      要：目的:探讨siRNA方法沉默HepG-2细胞中B7-H3基因表达对细胞周期、增殖及迁移能力的影响。方法:设计合成针对B7-H3基因的siRNA及无关干涉siRNA序列,并分别构建干涉载体pSilencer4.1-CMV neo/B7-H3及无关干涉载体pSilencer4.1-CMV neo/NC;采用脂质体Lipofectamine^(TM)2000转染对数生长期肝癌细胞HepG-2,经G418筛选后获得相应细胞模型;利用RT-PCR和Western blot方法分别检测空白对照组(WT)、无关干涉组(si-NC)和B7-H3干涉组(si-B7-H3)细胞中B7-H3 mRNA及蛋白表达水平;利用CCK-8细胞增殖实验及克隆形成实验评价各组细胞增殖情况;利用碘化丙锭(PI)染色流式细胞术检测各组细胞周期分布情况;利用细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力。结果:成功构建了pSilencer4.1-CMV neo/B7-H3干涉载体。RT-PCR及Western blot结果显示,B7-H3干涉组较空白对照组、无关干涉组mRNA及蛋白水平明显下降;CCK-8增殖、克隆形成实验、细胞划痕实验及流式结果表明B7-H3干涉组增殖受到明显抑制,克隆较小且克隆数减少,细胞周期阻滞于G_0/G_1期,细胞迁移能力受抑制。结论:利用siRNA靶向干涉B7-H3表达可抑制HepG-2细胞增殖并诱导细胞周期阻滞,降低细胞迁移能力,实验结果为开发针对B7-H3靶点的肝癌免疫治疗提供了初步实验及理论基础。

主 题 词：肝癌 B7-H3 增殖 细胞周期 细胞迁移 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1672-4992.2017.21.001

馆 藏 号：203277949...