肠道病毒-D68 VP1蛋白原核表达、纯化及抗原性的评价

作     者：郑惠文 杨泽宁 孙明 范海涛 宁若彤 李嘉祺 刘龙丁 Zheng Huiwen;Yang Zening;Sun Ming;Fan Haitao;Ning Ruotong;Li Jiaqi;Liu Longding

作者机构：650118昆明，中国医学科学院北京协和医学院&医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室 

基　　金：国家自然科学基金 (81373142)中国医学科学院医学生物学研究所博士创新基金 (2015-018-003) 

出 版 物：《国际免疫学杂志》 (International Journal of Immunology)

年 卷 期：2017年第40卷第5期

页      码：469-474页

摘      要：目的 原核表达EV-D68结构蛋白VP1，并对其抗原性进行评价。 方法 以肠道病毒68型P1基因为模板，设计引物扩增出目的片段VP1，将其连接至大肠杆菌表达载体pGEX-5X-1上。将重组表达载体pGEX-5X-1-VP1转化大肠杆菌表达菌株Rosetta (DE3)pLysS，对该工程菌进行诱导表达。菌体裂解后用SDS-PAGE电泳、Western-blot鉴定融合蛋白；对表达菌体进行超声破碎和亲和层析纯化；使用酶联免疫吸附试验方法评估目的蛋白与不同种属EV-D68阳性血清的结合能力及亲和力。 结果 成功构建融合表达载体pGEX-5X-1-VP1，经过双酶切及测序鉴定均正确；成功表达和纯化出EV-D68 (Enterovirus D68, EV-D68) VP1融合蛋白，经过聚丙烯酰胺凝胶电泳测定，得到与预期蛋白相对分子质量为61 000大小一致的目的条带；纯化蛋白与不同种属的阳性血清可以特异性结合，与兔血清、恒河猴血清、小鼠血清的亲和力常数分别为1.6×10 6 、3.9×10 5 、3.1×10 6 。 结论 成功表达了EV-D68 VP1融合蛋白，为研究EV-D68 VP1蛋白的结构、功能及中和抗体筛选奠定基础。

主 题 词：肠道病毒-D68 VP1蛋白 原核表达 亲和力 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1673-4394.2017.05.001

馆 藏 号：203278581...