心肌靶向纳米粒的构建及其防治小鼠心肌损伤的初步研究

作     者：刘莹莹 王晨 罗鹏飞 夏照帆 Liu Yingying;Wang Chen;Luo Pengfei;Xia Zhaofan

作者机构：海军军医大学长海医院烧伤外科全军烧伤研究所上海200433 

基　　金：国家自然科学基金(81501645) 国家自然科学基金国际(地区)合作与交流项目(81120108015) 全军后勤科研计划重大专项课题(AWS14C001) 

出 版 物：《中华烧伤杂志》 (Chinese Journal of Burns)

年 卷 期：2017年第33卷第11期

页      码：660-667页

摘      要：目的制备3－{ 4－[ 2－羟基－ （1－甲基乙胺基） 丙氧基]苯基}丙酸十六醇酯 （PAC） 修饰的纳米粒，观察其对心肌细胞的靶向性及对心肌的保护作用。方法（1）将HL－1心肌细胞按随机数字表法分成花青素Cy3标记的非靶向小干扰RNA（Cy3－siNC）组和针对NF－κB－p65基因设计的花青素Cy3标记的小干扰RNA（Cy3－si435）组，每组3孔。Cy3－siNC组细胞转染Cy3－siNC，Cy3－si435组细胞转染Cy3－si435。转染24 h，实时荧光定量PCR检测细胞NF－κB－p65 mRNA的表达。（2）采用复乳溶剂挥发法制备PAC修饰且载有Cy3－siNC（Cy3－siNC－PAC）的纳米粒和PAC修饰且载有Cy3－si435（Cy3－si435－PAC）的纳米粒。扫描电镜观察Cy3－si435－PAC纳米粒的形态，纳米粒度及zeta电位仪检测Cy3－si435－PAC纳米粒的粒径和电势，紫外分光光度计测定Cy3－si435－PAC纳米粒的包封率、载药量，透析法测定Cy3－si435－PAC纳米粒的Cy3－si435释放量。（3）另取HL－1细胞，按随机数字表法分成4组，每组9孔。阴性对照组加入5 μL PBS；25、50、100 mg/mL Cy3－si435－PAC纳米粒组分别加入5 μL 25、50、100 mg/mL的Cy3－si435－PAC纳米粒。分别于转染6、12、24 h时，每组各取3孔，噻唑蓝法检测细胞的增殖活性。（4）另取HL－1细胞，培养24 h后加入100 μL Cy3－si435－PAC纳米粒。分别于转染0、4、8、12、24 h时各取3孔细胞，流式细胞仪检测摄取Cy3－si435－PAC纳米粒的细胞百分比。（5）另取HL－1细胞，按随机数字表法将细胞分成2组，每组3孔。Cy3－siNC－PAC组加入100 μL Cy3－siNC－PAC纳米粒，Cy3－si435－PAC组加入100 μL Cy3－si435－PAC纳米粒。转染24 h，实时荧光定量PCR检测细胞NF－κB－p65 mRNA的表达。（6）取6只雄性C57BL/6J小鼠，按随机数字表法分为2组，每组3只。Cy3－siNC－LPS组和Cy3－si435－LPS组小鼠尾静脉分别注射500 μL Cy3－siNC－PAC纳米粒和Cy3－si435－PAC纳米粒（50 mg/mL），注射后24 h，再分别腹腔注射LPS（10 mg/kg），诱导心肌损伤。伤后24 h，小动物成像仪检测纳米粒在小鼠体内的分布情况。（7）另取9只雄性C57BL/6J小鼠，按随机数字表法分为3组，每组3只。Cy3－siNC－生理盐水（NS）组和Cy3－siNC－LPS组小鼠尾静脉注射500 μL 50 mg/mL的Cy3－siNC－PAC纳米粒，Cy3－si435－LPS组小鼠注射500 μL 50 mg/mL的Cy3－si435－PAC纳米粒。注射后24 h，Cy3－siNC－NS组小鼠腹腔注射NS；Cy3－siNC－LPS组和Cy3－si435－LPS组小鼠腹腔注射10 mg/kg LPS，诱导心肌损伤。伤后24 h，取各组小鼠心肌组织，HE染色观察心肌病理变化。对数据行t检验、单因素方差分析。结果（1）Cy3－si435组细胞NF－κB－p65 mRNA表达量为0.183±0.004，明显低于Cy3－siNC组的1.003±0.092（t＝15.46，P〈0.01）。（2）制备的Cy3－si435－PAC纳米粒形态良好，粒径大小为146.0 nm，电势为－29.2 mV，包封率为（86.9±1.1）%，载药量为（25.4±0.9）%，Cy3－si435释放稳定。（3）转染6、12、24 h，4组细胞增殖活性总体比较，差异均无统计学意义（F值为0.129～2.512，P值均大于0.05）。（4）转染0、4、8、12、24 h时，摄取Cy3－si435－PAC纳米粒的细胞百分比分别为（0.79±0.06）%、（31.04±1.59）%、（51.64±2.67）%、（68.15±2.60）%、（83.68±4.67）%。（5）Cy3－si435－PAC组细胞NF－κB－p65 mRNA的表达量为0.286±0.015，明显低于Cy3－siNC－PAC组细胞的1.002±0.073（t＝16.62，P〈0.01）。（6）伤后24 h，Cy3－siNC－LPS组和Cy3－si435－LPS组小鼠心肌细胞都能够观察到分布均匀的纳米粒。（7）Cy3－siNC－NS组小鼠心肌纤维结构致密，无炎性细胞浸润，胞质分布均匀；Cy3－siNC－LPS组小鼠心肌纤维结构疏松，炎性细胞浸润，胞质分布散乱；Cy3－si435－LPS组小鼠心肌纤维结构较致密，未见明显炎

主 题 词：脓毒症 NF—κB RNA 小分子干扰 心肌损伤 靶向纳米粒 

学科分类：100218[100218] 1002[医学-临床医学类] 1010[医学-医学技术类] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1009-2587.2017.11.002

馆 藏 号：203279545...