可诱导型PLK1 shRNA的乳腺癌MDA-MB-231细胞系的建立及PLK1敲低对细胞增殖的影响

作     者：薛慧 郭欣 李娜 李志红 彭帆 肖方祥 袁成福 Xue Hui;Guo Xin;Li Na;Li Zhihong;Peng Fan;Xiao Fangxiang;Yuan Chengfu

作者机构：三峡大学医学院宜昌443002 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(编号:81550029 30800410) 湖北省自然科学基金资助项目(编号:2015CFB198) 三峡大学人才启动基金资助项目(编号:KJ2014B064) 肿瘤微环境与免疫治疗湖北省重点实验室(三峡大学)开放基金资助项目(编号:2015KZL02) 宜昌市科学技术局资助项目(编号:A16-301-31) 

出 版 物：《重庆医科大学学报》 (Journal of Chongqing Medical University)

年 卷 期：2017年第42卷第11期

页      码：1400-1405页

摘      要：目的:建立稳定表达可诱导型polo样激酶1(polo-like kinase 1,PLK1)小发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA)的乳腺癌MDA-MB-231细胞系并研究PLK1敲低对MDA-MB-231细胞增殖、细胞周期的影响并探讨其可能的机制。方法:根据si RNA的原理设计2对靶向PLK1的shRNA序列,构建慢病毒表达质粒(PLK1 shRNA重组质粒);先用p LV-t TR/KRAB-Red空载体制备慢病毒并感染MDA-MB-231细胞;在此基础上再用PLK1 shRNA重组质粒制备慢病毒并感染上述MDA-MB-231细胞;对上述2次慢病毒感染的MDA-MB-231细胞用强力霉素(doxycycline,DOX)处理96 h后,用q RT-PCR及Western blot检测PLK1m RNA及蛋白的表达;用MTT法检测细胞增殖;用流式细胞术及碘化吡啶(PI)染色检测细胞周期。结果:成功构建靶向PLK1的shRNA慢病毒表达质粒,包装出慢病毒并感染MDA-MB-231细胞;成功建立稳定表达可诱导型PLK1 shRNA的MDA-MB-231细胞系,通过DOX诱导,可明显抑制该细胞系中PLK1在m RNA及蛋白水平的表达(P<0.01);PLK1敲低可明显抑制MDA-MB-231细胞的增殖(P<0.05);流式细胞术检测发现PLK1敲低可阻滞MDA-MB-231细胞于G2/M期(P<0.05)。结论:DOX诱导的PLK1敲低可明显抑制MDA-MB-231细胞增殖并阻滞细胞于G2/M期;经PLK1介导的肿瘤生物学行为变化,其机制可能涉及ERK1/2/Fra1/ZEB1信号通路。

主 题 词：polo样激酶1 可诱导型shRNA 乳腺癌 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13406/j.cnki.cyxb.001400

馆 藏 号：203279556...