入侵害虫梣粉虱的种特异性SS-CoⅠ检测技术

作     者：张桂芬 王玉生 冼晓青 万方浩 邵嘉文 ZHANG Guifen;WANG Yusheng;XIAN Xiaoqing;WAN Fanghao;SHAO Jiawen

作者机构：中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室北京100193 农业部外来入侵生物预防与控制研究中心北京100193 青岛农业大学农学与植物保护学院山东青岛266109 

基　　金：国家重点研发计划(2017YFC1200600、2016YFC1200600) 公益性行业(农业)科研专项(201303019、201103026) 农业部“一带一路”948项目(2016-X48) 

出 版 物：《生物安全学报》 (Journal of biosafety)

年 卷 期：2017年第26卷第4期

页      码：273-279页

摘      要：【目的】梣粉虱是新近入侵中国大陆的一种危险性果树和园林植物害虫,针对其体型微小,与近缘种粉虱形态相仿,很难快速准确区分的问题,以田间常见的11种/隐种粉虱为参考,采用基于mt DNA细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(mitochondrial DNA cytochrome c oxidase subunitⅠ,mt DNA COⅠ)基因的物种特异性(species-specific COⅠ,SS-COⅠ)PCR法,研究梣粉虱快速分子检测鉴定技术。【方法】利用mt DNA COⅠ基因通用型引物对LCO-1490/HCO-2198获得梣粉虱和其他常见粉虱的COⅠ基因序列,根据测序结果设计梣粉虱特异性SS-COⅠ引物1对(SPZWCF1/SPZWCR1),之后确定其对目的片段的扩增长度,并对该引物对的物种特异性和检测灵敏性进行检验。【结果】引物对SPZWCF1/SPZWCR1扩增片段的长度为426 bp。物种特异性检验结果显示,该对引物只对梣粉虱的mt DNA COⅠ基因具有扩增效果,对我国常见的其他种类的粉虱包括5种烟粉虱隐种(AsiaⅠ、AsiaⅡ1、AsiaⅡ3、MED、MEAM1隐种)以及桑粉虱、螺旋粉虱、黑刺粉虱、柑橘粉虱、双钩巢粉虱和温室粉虱等不具有交叉反应和扩增能力。灵敏性检验结果显示,该对引物不仅对不同性别、不同采集地的成虫具有良好的扩增效能,对2~4龄若虫以及单粒卵和初孵若虫亦具有同样的扩增效力,其最低检测阈值为75.1 pg·μL-1(相当于1/10240头雌性成虫)。【结论】该技术体系可用于梣粉虱的快速准确鉴定及其检测和监测,对有效阻截其进一步传播扩散具有重要作用。

主 题 词：梣粉虱 种特异性引物 检测阈值 快速鉴定 分子检测 监测 

学科分类：09[农学] 0904[农学-动物医学类] 090402[090402] 

D　O　I：10.3969/j.iwn.2095-1787.2017.04.003

馆 藏 号：203279565...