口疮病毒020基因的克隆、表达及多抗制备

作     者：王勇 赵玉洁 杨侃侃 殷冬冬 白彩霞 潘飞 梅跃辉 颜秀梅 王君 徐前明 蒋书东 WANG Yong;ZHAO Yujie;YANG Kankan;YIN Dongdong;BAI Caixia;PAN Fei;MEI Yuehui;YAN Xiumei;WANG Jun;XU Qianming;JIANG Shudong

作者机构：安徽农业大学动物科技学院合肥230036 安徽华澳生物技术有限公司合肥231131 

基　　金：国家自然科学基金(31602063) 安徽省自然科学基金(1508085QC60) 安徽农业大学稳定和引进人才科研项目(yj2015-16) 安徽农业大学大学生科技创新基金项目共同资助 

出 版 物：《安徽农业大学学报》 (Journal of Anhui Agricultural University)

年 卷 期：2017年第44卷第5期

页      码：780-783页

摘      要：羊口疮是由口疮病毒(orf virus,ORFV)引起的接触性、嗜上皮性的传染病。020基因是该病毒重要的酶活力调节蛋白。根据Gen Bank中020基因的序列设计引物,从ORFV-F10株感染的病料中提取DNA,PCR扩增获得目的基因。然后将其亚克隆至p ET-32a(+)原核表达载体,构建重组表达质粒p ET-32a-ORF-020。鉴定正确后转化BL21感受态细胞,进行IPTG诱导表达。表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot分析。最后将纯化的020蛋白免疫BALB/c雌鼠,制备多抗血清。SDS-PAGE结果表明,ORFV 020基因在体外获得正确表达,大小约37 k Da。Western-blot结果表明,制备的多抗血清能够与020蛋白发生特异性反应具有良好的反应原性。

主 题 词：羊口疮病毒 020基因 克隆 原核表达 多克隆抗体 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.13610/j.cnki.1672-352x.20171017.025

馆 藏 号：203279641...