真藓(Bryum argenteum)ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选

作     者：马晓英 韦伟 臧程 于晶 Ma Xiaoying;Wei Wei;Zang Cheng;Yu Jing

作者机构：上海师范大学生命与环境科学学院植物种质资源开发协同创新中心上海200234 

基　　金：国家自然科学基金(31570208) 上海植物种质资源工程技术研究中心项目(17DZ2252700) 上海师范大学校前瞻性预研项目(DYL201503) 

出 版 物：《上海师范大学学报（自然科学版）》 (Journal of Shanghai Normal University(Natural Sciences))

年 卷 期：2017年第46卷第5期

页      码：668-674页

摘      要：为了确定真藓最佳ISSR-PCR反应体系,采用PCR正交实验设计方法,对影响ISSR-PCR试验的模板DNA、引物、d NTPs、Mg2+、和Taq DNA聚合酶5个因素在4个水平上进行优化,并对100条引物逐一进行温度梯度PCR,筛选合适的引物并确定每个引物的最佳退火温度.结果显示优化的20μL ISSR-PCR反应体系中包括20 ng/20μL DNA模板、0.45μmol/L引物、2.65 mmol/L Mg^(2+)、0.4 U/20μL Taq DNA聚合酶、0.45 mmol/Ld NTPs.利用该体系最终筛选出50条扩增条带清晰,重复性好,多态性高的引物并确定其退火温度.这一体系的建立、引物的筛选及退火温度的确立为进一步利用ISSR分子标记技术对苔藓遗传多样性的研究提供理论基础.

主 题 词：真藓 ISSR 正交设计 引物筛选 退火温度 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 071001[071001] 07[理学] 

D　O　I：10.3969/J.ISSN.1000-5137.2017.05.009

馆 藏 号：203279736...