A型口蹄疫病毒1D蛋白在大肠埃希菌中的可溶性表达、纯化及电子显微镜检测

作     者：郭玉堃 明胜利 郭婉莹 杨国宇 郭豫杰 GUO Yu-kun;MING Sheng-li;GUO Wan-ying;YANG Guo-yu;GUO Yu-jie

作者机构：河南农业大学农业部动物生化与营养重点开放实验室郑州450002 

基　　金：农业部948重点计划(2011-G35) 国家转基因重大专项(2014ZX0801015B) 河南省高等学校重点科研项目(17A230013) 

出 版 物：《解剖学报》 (Acta Anatomica Sinica)

年 卷 期：2017年第48卷第6期

页      码：726-731页

摘      要：目的本实验旨在表达出高可溶性的A型口蹄疫病毒1D蛋白,并通过电子显微镜检测,以期望形成纳米样颗粒。方法根据A型口蹄疫病毒核酸序列,得到FMDV A/GDMM/CHA/2013株的1D蛋白基因,并进行截短和优化,共132个氨基酸;同时,从结肠弯曲杆菌(Campylobacter coli)中分离得到135个氨基酸的铁蛋白(Fn)基因片段,将A型口蹄疫病毒1D蛋白与铁蛋白串联,设计并合成了口蹄疫病毒1D蛋白-铁蛋白片段,命名为CcFnt166AS。构建了CcFnt166AS融合Grifin、GST、MBP、Sumo、Thioredoxin、γ-crystallin、ArsC、PpiB、CeHSP17等9种不同可溶性标签的表达重组载体。分别转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,SDSPAGE电泳对融合蛋白的可溶性表达进行检测,筛选出高可溶性表达的CcFnt166AS融合蛋白。重组蛋白通过NiNTA Agarose亲和纯化,进行电子显微镜检测。结果成功构建9种CcFnt166AS表达载体;9个标签中,MBP与CcFnt166AS蛋白相融合的可溶表达效果最好,并获得了高纯度的MBP-CcFnt166AS重组蛋白质;电子显微镜结果显示,MBP-CcFnt166AS形成了纳米样颗粒。结论本实验建立了稳定获得CcFnt166AS重组蛋白质的方法。

主 题 词：A型口蹄疫病毒 1D蛋白 铁蛋白 融合标签 可溶性 纳米颗粒 电子显微术 大肠埃希菌 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.16098/j.issn.0529-1356.2017.06.016

馆 藏 号：203279740...