大鼠微小病毒和细小病毒双重荧光定量PCR检测方法建立

作     者：孙竹筠 蔡骁垚 熊炜 陈懿斐 张泉 李泽君 魏晓锋 陈鸿军 SUN Zhu-yun;CAI Xiao-yao;XIONG Wei;CHEN Yi-fei;ZHANG Quan;LI Ze-jun;WEI Xiao-feng;CHEN Hong-jun

作者机构：中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 扬州大学兽医学院扬州225009 上海出入境检验检疫局上海200135 上海实验动物研究中心上海201203 

基　　金：上海市科委实验动物专项资金资助(15140900600) 

出 版 物：《实验动物与比较医学》 (Laboratory Animal and Comparative Medicine)

年 卷 期：2017年第37卷第5期

页      码：372-377页

摘      要：目的建立快速、准确地同时检测和鉴别大鼠细小病毒(RPV)和大鼠微小病毒(RMV)的双重TaqMan实时荧光定量PCR方法。方法根据GenBank中已公布的RMV NTU1株全基因组序列(JX627317.1),在1 705～1 808 nt处设计引物和TaqMan探针,根据RPV NTUI毒株的全基因组序列(JX827169),在863-967nt处设计引物和TaqMan探针。以构建的质粒参考物为模板建立荧光定量PCR检测方法,并对该鉴别检测方法的灵敏度、稳定性和特异性进行评价;用建立的荧光定量方法对50份临床样品进行检测,并用酶联免疫吸附试验(ELISA)的商品试剂盒进行验证。结果建立的RMV和RPV的鉴别荧光定量PCR方法标准曲线的线性关系良好,R2值可达0.99,最低检测限均为10拷贝数/μL;应用鉴别荧光定量PCR方法和ELISA检测试剂盒,对100份大鼠肝脏和50份血清样品病料进行检测,结果均为阴性。结论建立的RMV和RPV的TaqMan实时荧光定量PCR方法具有特异、灵敏的特点,适用于RMV和RPV的临床监测。

主 题 词：大鼠微小病毒(RMV) 大鼠细小病毒(RPV) TaqMan探针 荧光定量PCR 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1674-5817.2017.05.006

馆 藏 号：203279811...