类鼻疽伯克霍尔德菌BPSS0180基因的克隆、原核表达及生物信息学分析

作     者：张振兴 聂鑫 杨小健 曹瑞勇 李宝宝 黄海峰 朱姝 李国华 彭冬梅 李亚颖 王凤阳 杜丽 ZHANG Zhen xing;NIE Xin;YANG Xiao jian;CAO Rui yong;LI Bao bao;HUANG Hai feng;ZHU Shu;LI Guo hua;PENG Dong mei;LI Ya ying;WANG Feng yang;DU Li

作者机构：海南大学热带农林学院动物科技学院海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室海口市动物基因工程重点实验室海口570228 

基　　金：海南省重大科技计划项目(ZDKJ2016017-01) 

出 版 物：《中国畜牧兽医》 (China Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2017年第44卷第11期

页      码：3313-3319页

摘      要：试验旨在对类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei,***)的BPSS0180基因进行克隆和原核表达,并对其表达蛋白进行生物信息学分析。参照GenBank中类鼻疽伯克霍尔德菌K96243标准株BPSS0180基因序列设计1对引物,对类鼻疽伯克霍尔德菌hn-1株进行PCR扩增获得BPSS0180基因片段。将得到的BPSS0180基因连接到pET-28a(+)载体,构建pET-28a(+)-BPSS0180重组质粒,转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中,提取质粒进行酶切鉴定。鉴定正确后,将构建成功的pET-28a(+)-BPSS0180重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达,表达产物用SDS-PAGE和Western blotting进行分析。应用DNAMAN、ProtParam、SOPMA和Protscale对BPSS0180基因序列进行生物信息学分析。结果显示,本试验成功克隆了1 146bp的BPSS0180基因,诱导表达得到的His-BPSS0180融合蛋白大小约为45ku,且主要以包涵体形式存在。BPSS0180蛋白的分子式为C_1779H_2809N_545O_536S_7,分子质量为40.6ku,消光系数为40 575,疏水指数为85.43。其不稳定系数为46.52,属于不稳定蛋白;理论等电点(pI)为5.54,为酸性蛋白;总平均疏水性(GRAVY)是-0.261,为亲水性蛋白。该蛋白的二级结构以α-螺旋(58.79%)和无规卷曲(32.02%)为主,预测其在哺乳动物网织红细胞的半衰期为30h。本试验结果为进一步探究类鼻疽伯克霍尔德菌的BPSS0180基因提供了一定的理论依据。

主 题 词：类鼻疽伯克霍尔德菌 BPSS0180基因 克隆 原核表达 生物信息学分析 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.11.029

馆 藏 号：203279986...