H7N9流感病毒血凝素球状区的原核表达及免疫原性评价

作     者：李春明 王若涵 周军 权娅茹 冯靖 LI Chun-ming;WANG Ruo-han;ZHOU Jun;QUAN Ya-ru;FENG Jing

作者机构：长春祈健生物制品有限公司吉林长春130012 国药中生生物技术研究院有限公司第一研究室北京101111 中国食品药品检定研究院北京100050 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2017年第30卷第12期

页      码：1238-1244页

摘      要：目的原核表达H7N9流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)球状区,并评价其免疫原性。方法根据H7N9流感病毒HA晶体结构,设计含有2对和3对二硫键的球状区结构域HA1S(62-284 aa)和HA1L(57-289 aa),扩增后连接至pET-21b(+)载体,构建重组表达质粒pET-21b(+)-HA1S和pET-21b(+)-HA1L,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的包涵体经复性和柱层析纯化获得球状区蛋白。纯化的目的蛋白分别以CpG X1、Al(OH)_3和CpG X1+Al(OH)_3为佐剂免疫BALB/c小鼠,检测小鼠血清抗体水平和中和抗体水平,评价其免疫原性。结果重组表达质粒经双酶切和测序证明构建正确。两个目的蛋白能在大肠埃希菌中表达,经稀释复性和柱层析纯化后均为单体,HPLC检测纯度均大于95%。动物试验结果表明,单独使用CpG X1或Al(OH)_3不能增强免疫应答,同时使用CpG X1+Al(OH)_3能将IgG抗体水平提高3倍左右。体外假病毒中和试验结果表明,中和抗体水平均较低。结论在大肠埃希菌中高效表达了H7N9 HA1S和HA1L两个蛋白,纯化后的蛋白为均一稳定的单体,且具有一定的免疫原性,为进一步研发快速生产H7N9流感病毒基因工程疫苗提供了参考。

主 题 词：流感病毒 流感疫苗 血凝素 原核表达 免疫原性 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 0831[工学-公安技术类] 1007[医学-药学类] 100705[100705] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 100102[100102] 100103[100103] 0703[理学-化学类] 0836[0836] 10[医学] 

D　O　I：10.13200/j.cnki.cjb.002016

馆 藏 号：203280034...