以长链PCR为基础利用融合PCR扩增乙型脑炎病毒全长cDNA

作     者：李静 俞永新 安琪 杨力宏 孔艳 LI Jing,YU Yong-xin,AN Qi,et al(Wuhan Institute of Biological Products,Wuhan 430060,China)

作者机构：武汉生物制品研究所武汉430060 中国药品生物制品检定所疫苗一室北京100050 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2008年第21卷第12期

页      码：1047-1050,1053页

摘      要：目的以长链PCR(Long-PCR)技术为基础,应用融合PCR方法扩增乙型脑炎病毒(JEV)全长基因组。方法根据GenBank中收录的JEV全长基因组序列设计引物,分别扩增JEVSA14-14-2株的5′和3′半长分子,在5′端上游引物中引入T7启动子核心序列。利用细胞培养增殖病毒,提取病毒RNA,逆转录后采用Long PCR方法得到JEV的5′和3′两个半长分子,在此基础上进行融合PCR,得到JEV全长cDNA分子,克隆入pGEMT-easy载体,酶切鉴定并测序。结果扩增出均6000bp的JEV的5′和3′两个半长分子及约11000bp的全长cDNA片段,其二级结构丰富的非编码区未发生缺失。JEV全长cDNA分子与GenBank中收录的相关毒株的的核苷酸序列同源性最高达99%,其氨基酸序列同源性最高达96.3%。其E蛋白基因与野毒株和减毒株进行比较,核苷酸序列同源性高达98%～99%,氨基酸序列也未出现较大差异。结论已获得了乙型脑炎病毒SA14-14-2株全长基因组,为进一步构建感染性克隆奠定了基础。

主 题 词：乙型脑炎病毒 全长cDNA 长链PCR 融合PCR 

学科分类：07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 090102[090102] 0710[理学-生物科学类] 0831[工学-公安技术类] 1007[医学-药学类] 100705[100705] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 0703[理学-化学类] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13200/j.cjb.2008.12.20.lij.003

馆 藏 号：203280342...