靶向ezrin增强子关键区的CRISPR/Cas9载体的构建

作     者：郭晓龙 张青峰 野庆松 莫镇涛 李文娜 高书颖 GUO Xiao long;ZHANG Qing feng;YE Qing song;MO Zhen tao;LI Wen na;GAO Shu ying

作者机构：遵义医学院珠海校区生物工程系珠海519041 

基　　金：国家自然科学基金(31360212) 贵州省科技厅联合基金(LKZ04) 贵州省科学技术基金(黔科合J字2180号) 

出 版 物：《生物学杂志》 (Journal of Biology)

年 卷 期：2017年第34卷第6期

页      码：19-22页

摘      要：构建靶向人ezrin增强子关键区的CRISPR/Cas9载体并检测其基因敲除功能。设计2个gRNA,分别靶向人ezrin增强子关键区的上、下游。合成gRNA寡核苷酸序列,连接至质粒p X459构建重组质粒p X459-sgRNA-EL和p X459-sgRNA-ER。将鉴定正确的CRISPR/Cas9重组质粒共转染至食管癌EC109细胞中,提取细胞基因组DNA,针对gRNA靶位点两侧进行PCR扩增和亚克隆测序分析。经限制性内切酶酶切和测序鉴定表明,CRISPR/Cas9重组质粒构建正确。在共转染重组质粒的细胞基因组DNA中检测到ezrin增强子关键区的缺失。成功构建了靶向人ezrin增强子关键区的CRISPR/Cas9载体,能够实现目标序列的定向敲除。

主 题 词：靶向敲除 ezrin增强子 CRISPR/Cas9 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.2095-1736.2017.06.019

馆 藏 号：203280378...