苹果树腐烂病菌qPCR检测方法的建立

作     者：祁兴华 郭永斌 常永旗 胡同乐 王亚南 王树桐 曹克强 无

作者机构：河北农业大学植物保护学院河北保定071001 

基　　金：国家重点研发计划"苹果化肥农药减施增效技术集成研究与示范"(2016YFD0201100) 国家苹果产业技术体系(CARS-27) 新疆兵团第二师科技攻关计划(2015NYGG12) 

出 版 物：《河北农业大学学报》 (Journal of Hebei Agricultural University)

年 卷 期：2017年第40卷第6期

页      码：65-71页

摘      要：利用ITS、β-微管蛋白和EF-1α基因序列的通用引物来扩增苹果树腐烂病菌菌株Vmm41,产物序列,与GenBank中的序列对比,设计并筛选出特异性引物对VE1-F/VE1-R。将目的片段连接到载体pUC19上制成标准品,通过优化退火温度和引物浓度,建立了实时定量PCR检测体系,并对该体系的特异性、灵敏度和可靠性进行了验证。结果表明,该体系可检测到26.4fg/μL的模板浓度,并可从苹果轮纹病菌、链格孢菌、层出镰刀菌、木霉菌和青霉菌等苹果园常见真菌中特异性的检测出苹果树腐烂病菌。用该体系对人工接种腐烂病菌的苹果叶片进行检测验证,结果表明,利用该检测体系可检测出叶片未发病部分的腐烂病菌数量。本研究建立的定量PCR检测体系可用于苹果树腐烂病菌的快速检测,为苹果树腐烂病侵染规律及预警研究提供新方法。

主 题 词：苹果腐烂病菌 实时定量PCR 检测方法 

学科分类：09[农学] 0904[农学-动物医学类] 090401[090401] 090402[090402] 

D　O　I：10.13320/j.cnki.jauh.2017.0127

馆 藏 号：203280407...