猪源大肠杆菌氟苯尼考耐药基因SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测试剂盒的研制

作     者：余波 杨莉 姜玲玲 徐景峨 周思旋 杨粤黔 YU Bo;YANG Li;JIANG Lingling;XU Jinge;ZHOU Sixuan;YANG Yueqian

作者机构：贵州省农业科学院畜牧兽医研究所贵州贵阳550005 

基　　金：贵州省农业科技攻关项目(黔科合NY3009-2号) 贵州省重大科技专项(黔科合重大专项字6014号) 贵州省科学技术基金项目(黔科合LH字7694号) 

出 版 物：《河南农业科学》 (Journal of Henan Agricultural Sciences)

年 卷 期：2017年第46卷第11期

页      码：152-156页

摘      要：根据Gen Bank中猪源大肠杆菌氟苯尼考耐药基因floR的序列设计1对特异性引物,扩增出floR基因片段,克隆到p MD-18T载体上,构建p MD-18T-floR阳性标准质粒。通过SYBR GreenⅠ荧光定量PCR反应条件的优化、荧光定量PCR标准曲线的建立、熔解曲线的分析及敏感性、特异性、重复性试验,建立针对猪源大肠杆菌氟苯尼考耐药基因floR的荧光定量PCR检测方法,并研制出检测试剂盒,同时对从养殖场分离的156株大肠杆菌进行耐药表型和耐药基因检测。结果显示,研制的试剂盒灵敏度可达1.0×101拷贝,重复性好,特异性强,对大肠杆菌磺胺类耐药菌株、β-内酰胺类耐药菌株、大环内酯类耐药菌株检测均为阴性,熔解曲线分析,扩增产物的熔解温度为88.8~89.2℃,没有引物二聚体和非特异性扩增峰出现,耐药表型与耐药基因检测符合率为96.7%。表明研制的试剂盒适合于临床样品猪源大肠杆菌氟苯尼考耐药基因的检测。

主 题 词：大肠杆菌 氟苯尼考 floR基因 SYBR GreenⅠ荧光定量 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.15933/j.cnki.1004-3268.2017.11.027

馆 藏 号：203280542...