pcDNA3.1/SjDLC和pcDNA3.1/mIFN-γ重组质粒构建及表达

作     者：高勇强 阳青兰 胡丽 梁瑜 刘彦 张愉快 王可耕 肖建华 

作者机构：南华大学医学院病原生物学研究所湖南衡阳421001 南华大学护理学院内护教研室 南华大学医学院寄生虫学教研室 

基　　金：湖南省教育厅科学研究项目(编号:13C824) 湖南省研究生科研创新项目(CX2015B415) 湖南省分子靶标新药研究协同创新中心资助项目(NO.2015-351) 特殊病原体防控湖南省重点实验室资助项目(NO.2014-5) 

出 版 物：《中南医学科学杂志》 (Medical Science Journal of Central South China)

年 卷 期：2017年第45卷第6期

页      码：558-561,579页

摘      要：目的构建日本血吸虫动力蛋白轻链DNA疫苗和小鼠干扰素真核表达质粒,研究其在HeLa细胞及动物体内的表达。方法设计特异性引物,PCR扩增获取动力蛋白轻链(SjDLC)与干扰素-γ(IFN-γ)基因,克隆于pcDNA3.1真核质粒,经双酶切及测序鉴定。将两种重组质粒分别转染至HeLa细胞,Western blot鉴定其表达。真核质粒经左腿股四头肌免疫小鼠,在末次免疫2周后,PCR法检测小鼠肌组织内SjDLC和IFN-γ基因,免疫组织化学法检测基因的表达,MTT法检测T细胞增殖水平。结果 PCR和双酶切能检测到280 bp的SjDLC基因及480 bp的IFN-γ基因;Western blot显示在12 kDa和19 kDa处有阳性反应条带,与SjDLC和IFN-γ分子量大小一致,两种基因能在HeLa细胞中表达。PCR及免疫组化显示两种基因能在小鼠肌肉组织中存在和表达。MTT法显示两种质粒均能刺激T细胞增殖。结论成功构建pcDNA3.1/SjDLC和pcDNA 3.1/mIFN-γ真核质粒,两种质粒能在HeLa细胞和动物体内表达。

主 题 词：DNA疫苗 动力蛋白轻链 干扰素-γ 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.15972/j.cnki.43-1509/r.2017.06.006

馆 藏 号：203280977...