AMPKγ基因沉默对AMPK活化及调血脂作用的影响

作     者：苏岩 郭鹏 季宇彬 

作者机构：哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心黑龙江哈尔滨150076 中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所北京100193 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(81001437) 北京市自然科学基金资助项目(7102111) 

出 版 物：《药学学报》 (Acta Pharmaceutica Sinica)

年 卷 期：2013年第48卷第6期

页      码：842-847页

摘      要：构建针对AMPKγ基因的siRNA慢病毒载体,检测其介导的RNA干扰对人肝癌细胞株HepG2中AMPKγ基因表达的沉默作用,并考察AMPKγ基因沉默对天然AMPK激动剂虫草素激活AMPK和调节脂质合成的影响。设计并合成了特异针对AMPKγ基因的shRNA Oligo片段,经退火、酶切、连接将目的片段插入到慢病毒干扰载体中,经感受态细胞转化、PCR鉴定挑选阳性克隆测序后,与包装质粒和包膜质粒共转染至293T细胞包装病毒,收集浓缩病毒进行滴度测定。通过荧光观察和Western blotting筛选可有效沉默AMPKγ基因的慢病毒株。在AMPKγ基因稳定沉默细胞株中,利用Western blotting考察AMPKγ基因沉默对虫草素促AMPK磷酸化活性的影响,油红O染色观察虫草素对细胞内脂质堆积情况的影响,并用试剂盒测定细胞内TC、TG含量。结果表明,成功构建了4种特异针对AMPKγ基因的慢病毒干扰载体(GR084、GR085、GR086、GR087),Western blotting检测结果显示重组慢病毒株GR085的基因沉默效率最高;给予虫草素并不会影响AMPKγ蛋白的表达,但能够显著上调正常细胞内AMPK蛋白的磷酸化水平。利用慢病毒稳定沉默AMPKγ基因的表达后,虫草素促AMPK磷酸化作用和下调脂质合成作用被显著抑制。研究表明,AMPKγ亚基可能与虫草素活化AMPK和调节脂质合成作用相关。

主 题 词：HepG2细胞系 腺苷蛋白激酶 慢病毒载体 RNA干扰 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1007[医学-药学类] 1006[医学-中西医结合类] 1004[医学-公共卫生预防医学类] 100706[100706] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 100602[100602] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.16438/j.0513-4870.2013.06.017

馆 藏 号：203281054...