可控细胞膜孔形成蛋白基因的克隆与表达

作     者：施伟庆 陈芹 孙怀昌 

作者机构：扬州大学兽医学院江苏扬州225009 

出 版 物：《中国兽医科技》 (Chinese Journal of Veterinary Science and Technology)

年 卷 期：2004年第34卷第7期

页      码：18-23页

摘      要：根据Wood 4 6株金黄色葡萄球菌α溶血素 (α HL)基因序列设计了引物 ,用高保真PCR从 180 0株金黄色葡萄球菌基因组DNA中扩增出了 0 .9kb的α HL基因 ,序列测定结果显示 ,两菌株α HL基因的核苷酸序列有 6个碱基差异 ,但仅引起 1个氨基酸替换。用PCR分段克隆和定点突变技术将大肠埃希氏菌外膜蛋白A信号肽序列与α HL编码区融合 ,并将其第 130～ 134位氨基酸替换为 5个连续的组氨酸 ,获得的融合基因命名为H5基因。将其克隆入 pET 30a质粒 ,用获得的重组质粒pET H5转化感受态大肠埃希氏菌 ,获得分泌性表达H5的重组菌。经IPTG诱导后 ,重组菌表达出分子质量为 35ku的H5蛋白。经镍柱亲和层析纯化的H5对兔红细胞的半数溶血值为 180ng/mL ,能使鼠成纤维细胞PA317获得对台盼蓝和海藻糖的通透性 ,且能被Zn2 + 抑制。提示 ,表达的H5蛋白为可控细胞膜孔形成蛋白 。

主 题 词：金黄色葡萄球菌 a溶血素基因 突变 原核表达 可控膜孔形成蛋白 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 090601[090601] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 0906[农学-水产类] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1673-4696.2004.07.004

馆 藏 号：203281231...