产气荚膜梭菌α毒素基因的克隆表达和生物学活性的鉴定

作     者：梁光军 田银芳 文其乙 张小荣 潘志明 高玉 高崧 焦新安 刘秀梵 

作者机构：扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室扬州225009 扬州大学实验农场 苏北人民医院 

出 版 物：《中国人兽共患病杂志》 (Chinese Journal of Zoonoses)

年 卷 期：2004年第20卷第7期

页      码：573-576页

摘      要：目的　利用原核表达系统表达具有生物学活性的产气荚膜梭菌α毒素。方法　设计针对α毒素基因的一对引物 ,用聚合酶链式反应 (PCR)技术扩增出α毒素的全基因。经测序确认正确后 ,回收的α毒素目的条带与 pGEX6 p - 1表达载体经限制性内切酶XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切后 ,进行连接 ,转化大肠杆菌BL2 1。诱导表达后 ,做SDS -PAGE电泳 ,出现特异的表达产物条带。表达产物做溶血活性、卵磷脂水解活性和腹腔接种小鼠实验。结果　构建的重组质粒经内切酶XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切后 ,发现特异的目的基因条带。SDS -PAGE电泳后 ,发现重组菌株有特异的表达条带。实验证明表达产物具有溶血活性、卵磷脂水解活性和腹腔接种后致死小鼠特性。结论　重组菌株BL2 1(pGEX6p - 1-cpα)表达了具有活性的α毒素蛋白。目的　利用原核表达系统表达具有生物学活性的产气荚膜梭菌α毒素。方法　设计针对α毒素基因的一对引物 ,用聚合酶链式反应 (PCR)技术扩增出α毒素的全基因。经测序确认正确后 ,回收的α毒素目的条带与 pGEX6 p - 1表达载体经限制性内切酶XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切后 ,进行连接 ,转化大肠杆菌BL2 1。诱导表达后 ,做SDS -PAGE电泳 ,出现特异的表达产物条带。表达产物做溶血活性、卵磷脂水解活性和腹腔接种小鼠实验。结果　构?

主 题 词：产气荚膜梭菌 α毒素基因 克隆表达 生物学活性 鉴定 聚合酶链式反应 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1002-2694.2004.07.005

馆 藏 号：203281386...