洼地绵羊防御素sBD-1基因克隆、序列分析及SYBR Green Ⅰ实时荧光定量检测方法的建立与应用

作     者：王金良 郭显坡 沈志强 李敏 任艳玲 WANG Jin-liang;GUO Xian-po;SHEN Zhi-qiang;LI Min;REN Yan-ling

作者机构：山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600 山东绿都生物科技有限公司山东滨州256600 山东省洼地绵羊繁育技术研究推广中心山东滨州256600 

基　　金：国家"863"计划资助项目(2008AA10Z142) 山东省自然科学基金资助项目(Y2007D12) 山东省良种工程资助项目(2006GG22) 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2011年第31卷第5期

页      码：720-724,729页

摘      要：根据GenBank上登录的绵羊防御素基因序列,经多重比较后,设计1对引物,从洼地绵羊舌上皮组织中扩增到防御素sBD-1基因,克隆到pMD18-T载体中进行测序。结果表明,扩增基因全长215 bp,编码64个氨基酸。基因进化树分析表明,与蒙古绵羊sBD-1基因有较近的亲缘关系,核苷酸同源性为98.5%;而与黄牛的亲缘关系最远,核苷酸同源性84.6%。氨基酸序列分析表明,序列内无信号肽区域,具有3个潜在的抗原表位。以pMD18-T/sBD-1质粒为模板建立了sBD-1基因SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法,核酸电泳、扩增动力学曲线、溶解曲线及重复性试验表明,检测方法具有良好的稳定性和特异性,得到的回归方程(R2=0.998)表明PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在良好的线性关系,从舌、盲肠及输卵管等组织中可以进行有效的检测,检测灵敏度为83.9 copies/μL。该方法为进一步研究防御素sBD-1基因在洼地绵羊抗逆性过程中的作用奠定了基础。

主 题 词：洼地绵羊 sBD-1基因 序列分析 荧光定量 

学科分类：090602[090602] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2011.05.026

馆 藏 号：203281411...