刚地弓形虫表面抗原1、2 B细胞表位基因的融合表达和鉴定

作     者：王钊哲 许瑞 洪炀 林矫矫 陆珂 李浩 陈兆国 石耀军 吴思敏 江嘉欣 李嘉静 朱传刚 WANG Zhao-zhe;XU Rui;HONG Yang;LIN Jiao-jiao;LUKe;LI Hao;CHEN Zhao-guol;SHI Yao-jun;WU Si-min;JIANG Jia-xin;LI Jia-jing;ZHU Chuan-gang[1~]

作者机构：中国农业科学院上海兽医研究所农业部寄生虫学重点开放实验室国家防治动物血吸虫病专业实验室上海200241 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009 

基　　金：中央级公益性科研院所基本科研业务费(No.2017JB20)~~ 

出 版 物：《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 (Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases)

年 卷 期：2017年第35卷第6期

页      码：575-579页

摘      要：目的构建刚地弓形虫(以下简称弓形虫)表面抗原(SAG)1、2 B细胞表位基因片段的原核表达系统,并对其免疫反应性进行分析。方法根据GenBank中已公布的编码弓形虫表面抗原的SAG基因序列,分析SAG1和SAG2基因的B细胞表位,设计并合成弓形虫表面抗原SAG1和SAG2蛋白的B细胞表位基因,将目的基因与p ET-28a(+)表达质粒连接,并转化至大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受态细胞中,挑取完整单个菌落于含卡那霉素的LB液体培养基中,菌液进行PCR扩增、双酶切和测序鉴定;菌液振荡培养至吸光度(A450值)为0.6~0.8时,加入终浓度为1 mmol/L的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达,得到带有His标签的融合蛋白,进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE))电泳,对蛋白的可溶性进行分析。使用His亲和层析柱对表达的重组蛋白进行纯化,将带有His标签的纯化重组蛋白进行蛋白质印迹(Western blotting)分析和ELISA分析免疫反应性。结果构建的p ET28a(+)-SAG重组质粒,菌液经PCR、双酶切鉴定结果显示,在909 bp处出现特异性目的条带,与预期相符,经测序表明重组表达质粒构建成功。SDS-PAGE鉴定结果显示,重组蛋白rSAG相对分子质量(Mr)约50 000,为可溶性表达,与预期结果相符。Western blotting分析结果显示,重组蛋白可以与弓形虫感染小鼠阳性血清1∶100发生特异性结合。ELISA检测结果显示,重组蛋白稀释度为1∶1,阳性血清稀释度为1∶50时,阳性反应最明显,A450值为1.037 9。不同稀释倍数的重组蛋白r SAG与不同浓度的小鼠弓形虫阳性血清均可发生反应,并能很好的区分阴性和阳性血清。结论构建了弓形虫表面抗原SAG1和SAG2蛋白的B细胞表位基因的原核表达系统,重组蛋白rSAG为可溶性表达,并具有较好的免疫反应性。

主 题 词：刚地弓形虫 抗原表位 重组序列 免疫反应性 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

馆 藏 号：203281498...