慢病毒介导CD36基因沉默细胞株的构建及其对caveolin-1蛋白表达的影响

作     者：李敬达 余承洁 王仁军 付常振 修志龙 刘庆平 Jingda Li;Chengjie Yu;Renjun Wang;Changzhen Fu;Zhilong Xiu;Qingping Liu

作者机构：大连理工大学生命科学与技术学院辽宁大连116024 大连大学生命科学与技术学院辽宁省糖脂代谢重点实验室辽宁大连116600 

基　　金：国家自然科学基金(No.30971232)资助~~ 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2018年第34卷第1期

页      码：110-121页

摘      要：CD36作为重要的清道夫受体密切参与了巨噬细胞对氧化低密度脂蛋白的摄取作用,为了进一步研究CD36的功能,本文利用慢病毒介导的shRNA干扰技术,构建了CD36基因沉默巨噬细胞(J774A.1)株,并以此为模型分析了CD36在caveolin-1蛋白表达过程中的作用。首先,针对CD36基因序列设计合成5条shRNA片段,并构建得到pLKO.1-CD36-shRNA慢病毒干扰载体,测序鉴定后与psiCHECK-Ⅱ-CD36载体共转染入293T细胞中,筛选出有效的CD36-shRNA。将慢病毒干扰载体与病毒包装质粒共转染入293T细胞,包装得到慢病毒颗粒,之后感染J774A.1细胞,经嘌呤霉素筛选后得到CD36基因沉默稳转细胞株。Western blotting及激光共聚焦检测结果表明CD36基因沉默效率达90%,并且伴随着CD36的基因沉默,与之结合的DiI-oxLDL也随之大幅降低,证明构建成功具有良好生物学活性的CD36基因沉默细胞株。最后,抑制剂处理及oxLDL给药刺激实验结果表明,CD36的基因沉默能够显著降低JNK及ERK的磷酸化水平,进而抑制了caveolin-1的蛋白表达,表明CD36能够经由JNK及EKR信号传导调节caveolin-1的蛋白表达。

主 题 词：CD36受体 shRNA基因干扰 氧化低密度脂蛋白 Caveolin-1 巨噬细胞 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 0831[工学-公安技术类] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 100201[100201] 0836[0836] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13345/j.cjb.170135

馆 藏 号：203282135...