BVDV SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法与RT-PCR方法的建立与应用

作     者：马鹏 李林杰 常秋燕 王悦萦 郭富城 刘萍 马晓霞 马忠仁 MA Peng;LI Linjie;CHANG Qiuyan;WANG Yueying;GUO Fucheng;LIU Ping;MA Xiaoxia;MA Zhongren

作者机构：西北民族大学甘肃省动物细胞工程技术研究中心甘肃兰州730030 西北民族大学生命科学与工程学院甘肃兰州730030 

基　　金：企业横向项目(No.XBMu-2015-Bc-11) 

出 版 物：《华北农学报》 (Acta Agriculturae Boreali-Sinica)

年 卷 期：2017年第32卷第A1期

页      码：49-53页

摘      要：利用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法和RT-PCR方法建立2种有效地实验室检测牛病毒性腹泻病毒的方法。根据Gen Bank中登录的牛病毒性腹泻病毒基因序列,选取14株BVDVⅠ型和7株BVDVⅡ型,经序列比对后,设计合成1对特异性引物,建立了检测BVDV的RT-PCR方法和SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法。通过对RT-PCR方法和SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的特异性、灵敏性和重复性进行检测。结果显示,该方法可从BVDV标准毒株Oregon C24V中扩增出250 bp的特异性片段,对牛细小病毒、牛副流感病毒、牛腺病毒、呼肠孤病毒的扩增结果均为阴性,对BVDV C24V株、GSTZ株、Av69株、S183株和BVDVⅡ型扩增结果为阳性。经对标准毒株的细胞毒进行检测,RT-PCR的灵敏性为10-1TCID_(50)/mL,SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的灵敏性为3.4×102copies/μL。应用2种方法对临床血清样本进行检测,结果比病毒分离方法更为敏感,操作简便。表明建立的RT-PCR方法和SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法具有特异、灵敏、高效、快速的特点,可用于BVDV的流行病学监测、实验室检测以及诊断。

主 题 词：牛病毒性腹泻病毒(BVDV) RT-PCR SYBR GreenⅠ荧光定量PCR 应用 

学科分类：09[农学] 0904[农学-动物医学类] 090401[090401] 

核心收录：

D　O　I：10.7668/hbnxb.2017.S1.009

馆 藏 号：203282739...