重叠PCR法构建宫颈癌相关的EGFR基因G719S和T790M融合重组载体

作     者：董巍檑 向花花 彭华 龚咏晴 周晶 张宏全 郭紫芬 DONG Weilei1, XIANG Huahua2, PENG Hua2, GONG Yongqing2, ZHOU Jing2, ZHANG Hongquanz, GUO Zifen2

作者机构：南华大学附属第一医院妇产科湖南衡阳421001 南华大学药物药理研究所湖南省分子靶标新药研究协同创新中心湖南衡阳421001 

基　　金：湖南省卫计委科研计划课题(C2016083) 

出 版 物：《临床检验杂志》 (Chinese Journal of Clinical Laboratory Science)

年 卷 期：2018年第36卷第2期

页      码：139-141,147页

摘      要：目的构建包含与宫颈癌相关的EGFR基因G719S和T790M位点重组p MD19-exon18-exon20载体,为制备突变型EGFR基因重组载体提供模板。方法以健康人全血基因组DNA作为模板,设计2对有重叠互补区的特异性引物,对EGFR基因的exon18和exon20两片段分别进行扩增,用重叠PCR技术将exon18和exon20片段进行连接,再将连接产物exon18-exon20片段插入p MD19-T质粒,构建成野生型p MD19-exon18-exon20载体,转入至大肠埃希菌感受态细胞DH5α中进行表达,利用菌液PCR和基因组测序进行鉴定。结果琼脂糖凝胶电泳结果显示,exon18和exon20两位点扩增片段在778 bp和596 bp处有清晰的目的条带,两片段的融合产物exon18-exon20片段可在1 374 bp处见一清晰目的条带;经菌液PCR和基因组测序结果鉴定,EGFR基因融合重组质粒均与预期结果一致。结论利用重叠PCR法将exon18和exon20片段进行融合,且成功构建了EGFR基因重组表达载体。

主 题 词：EGFR基因 载体构建 宫颈癌 重叠PCR 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.13602/j.cnki.jcls.2018.02.17

馆 藏 号：203283051...