家蚕微孢子虫己糖激酶基因的克隆及序列结构分析和原核表达

作     者：陈红丽 彭祥然 李孝良 Bismark Kyei 尚瑞沙 齐静茹 张轶岭 徐莉 沈中元 Chen Hongli;Peng Xiangran;Li Xiaoliang;Bismark Kyei;Shang Ruisha;Qi Jingru;Zhang Yiling;Xu Li;Shen Zhongyuan

作者机构：江苏科技大学生物技术学院江苏镇江212018 中国农业科学院蚕业研究所江苏镇江212018 

基　　金：现代农业产业技术体系建设专项(No.CARS-18) 

出 版 物：《蚕业科学》 (ACTA SERICOLOGICA SINICA)

年 卷 期：2018年第44卷第1期

页      码：70-76页

摘      要：己糖激酶（hexokinase,HXK）是糖酵解途径的限速酶,在能量代谢中充当极其重要的角色。家蚕微孢子虫（Nosema bombycis）具有完整的糖酵解途径,其基因组中有2个序列相似度较高的己糖激酶编码基因拷贝（NBO_1320g0001,NBO_27g0008）。根据其中的一个基因拷贝（NBO_27g0008）序列设计特异性引物,以家蚕微孢子虫基因组DNA为模板成功克隆了该基因,命名为Nb HXK-1。该基因大小为894 bp,包含完整的ORF,编码297个氨基酸,预测蛋白质的分子质量为34.241 k D,等电点（p I）为5.26,蛋白质的氨基酸序列有31个磷酸化位点和4个潜在的N-糖基化位点,无跨膜结构域,有信号肽,二级结构主要由α螺旋（54.55%）、延伸片段（17.80%）和无规则卷曲（27.61%）组成。系统进化分析显示Nb HXK-1与东方蜜蜂微孢子虫（Nosema ceranae）己糖激酶（Nc HXK）氨基酸序列的亲缘关系较近。将Nb HXK-1基因插入原核表达载体p ET-28a（＋）并转化BL21（DE3）感受态细胞,用IPTG诱导表达后经蛋白质串联质谱鉴定和Western blot分析显示,获得了与预期大小一致的约35 k D的重组Nb HXK-1蛋白,为进一步阐明Nb HXK-1的生物学功能奠定了基础。

主 题 词：家蚕微孢子虫 己糖激酶 基因克隆 序列特征 原核表达 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 071002[071002] 090102[090102] 

D　O　I：10.13441/j.cnki.cykx.2018.01.009

馆 藏 号：203283141...