中东呼吸综合征冠状病毒重组酶介导核酸检测方法的建立

作     者：周冬根 罗洁 许锡光 俞雪均 ZHOU Dong-gen;LUO Jie;XU Xi-guang;YU Xue-jun

作者机构：宁波国际旅行卫生保健中心浙江宁波315012 宁波出入境检验检疫局 

基　　金：国家十三五重点研发计划(2016YFF0203204) 浙江省自然科学基金项目(LY16H260004) 国家质检总局科技计划项目(2016IK176) 

出 版 物：《中国国境卫生检疫杂志》 (Chinese Journal of Frontier Health and Quarantine)

年 卷 期：2017年第40卷第6期

页      码：385-389页

摘      要：目的建立快速、敏感、特异的逆转录重组酶介导(Reverse-transcription recombinase-aid assay,RT-RAA)核酸检测方法,用于中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-Co V)的检测。方法根据MERS-Co V基因的保守序列设计并合成特异性RAA引物及探针。通过条件优化,以10倍系列稀释经第3代慢病毒载体构建的假病毒颗粒阳性标准品为模板,进行RT-RAA扩增,并进行特异性、敏感性以及临床样本检测。结果建立的RT-RAA方法检测MERS-Co V假病毒颗粒阳性标准品的灵敏度为10拷贝/ml,高于实时荧光RT-PCR方法(10~2拷贝/ml);用该方法检测MERS-Co V假病毒颗粒有明显扩增,而甲型H1N1流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒等4种呼吸道病毒的检测均为阴性;检测我国首例输入性MERS病例的临床样本及1例英国QCMD协会的室间质评阳性灭活样本均能检出,与实际结果相符。检测时间(20 min)大大低于实时荧光RT-PCR(90 min)。结论建立的MERS-Co V RT-RAA检测方法灵敏、特异、快速,可用于MERS-Co V感染的现场快速检测和流行病学调查。

主 题 词：中东呼吸综合征冠状病毒 重组酶介导 假病毒颗粒 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.16408/j.1004-9770.2017.06.001

馆 藏 号：203283159...