ELP30-tag蛋白纯化能力的原核表达研究

作     者：陈远侨 龙定沛 豆晓雪 祁润 赵爱春 CHEN Yuan-qiao;LONG Ding-pei;DOU Xiao-xue;QI Run;ZHAO Ai-chun

作者机构：家蚕基因组生物学国家重点实验室西南大学生物技术学院 

基　　金：国家蚕桑产业技术体系资助项目(CARS-18-ZJ0201) 

出 版 物：《中国生物工程杂志》 (China Biotechnology)

年 卷 期：2018年第38卷第2期

页      码：54-60页

摘      要：目的：探究一种小分子量类弹性蛋白标签（elastin-like protein tag,ELP tag）——ELP30-tag在原核表达系统中的蛋白纯化能力。方法：人工合成ELP30-tag基因并将其构建于pET-28a（＋）载体,结合2种内含肽（intein1和intein2）基因和增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,eGFP）基因,构建4个含有不同元件序列的原核表达载体：pET-ELP30、pET-ELP30-eGFP、pET-ELP30-intein1-eGFP和pET-eGFP-intein2-ELP30;将表达载体转化大肠杆菌BL21（DE3）,经IPTG诱导重组蛋白表达,并通过可逆相变循环（inverse transition cycling,ITC）纯化重组蛋白ELP30、ELP30-eGFP、ELP30-intein1-eGFP和eGFP-intein2-ELP30,随后通过调节溶液pH值或添加二硫苏糖醇（DL-Dithiothreitol,DTT）分别诱导intein1和intein2断裂,最后再经ITC分离获得纯eGFP。结果：利用设计的ELP30-tag成功纯化获得了重组蛋白ELP30、ELP30-eGFP和eGFP-intein2-ELP30;重组蛋白ELP30-intein1-eGFP和eGFP-intein2-ELP30中的内含肽可经诱导发生断裂而释放eGFP,但未能分离获得纯eGFP。由此为小分子量ELP-tag的运用和优化设计奠定了一定基础。

主 题 词：类弹性蛋白 内含肽 增强绿色荧光蛋白 原核表达 蛋白质纯化 

学科分类：08[工学] 09[农学] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.13523/j.cb.20180208

馆 藏 号：203283192...