猪流行性腹泻病毒HB2015分离株N基因表达及单克隆抗体的制备

作     者：祁光宇 刘斌 赵兴绪 QI Guang-yu;LIU Bin;ZHAO Xing-xu

作者机构：甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中农威特生物科技股份有限公司甘肃兰州730046 

基　　金：甘肃省科技计划项目(1104NKCA167) 

出 版 物：《江苏农业学报》 (Jiangsu Journal of Agricultural Sciences)

年 卷 期：2018年第34卷第1期

页      码：76-80页

摘      要：根据已经发表的猪流行性腹泻病毒N基因序列(GenBank:KX016034.1),设计1对特异性引物(上、下游分别插入Bam HⅠ和XhoⅠ酶切位点),通过RT-PCR技术扩增N基因,在测序鉴定正确后经Bam HⅠ和XhoⅠ双酶切,将其克隆至原核表达载体pET-32a上,获得重组表达质粒pET32a-N。表达的蛋白质经纯化后进行Western blotting鉴定分析。以表达的PEDV-N蛋白作为抗原,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA筛选及亚克隆,获2株PEDV-N特异性单克隆抗体。对获得的单抗进行Western blotting鉴定和间接免疫荧光试验(IFA)分析,结果显示2株单抗均能与PEDV-N蛋白特异性结合和识别。以上结果表明PEDV-N蛋白在大肠杆菌中成功表达,且成功制备了2株具有生物学活性的特异单抗,为建立PEDV金标试纸诊断方法奠定了基础。

主 题 词：猪流行性腹泻病毒 N基因 原核表达 单克隆抗体 IFA分析 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1000-4440.2018.01.011

馆 藏 号：203283852...