细粒棘球蚴EG19抗原基因的克隆表达及重组蛋白反应原性研究

作     者：陈英 乔军 孟庆玲 钟文强 刘田莉 贡莎莎 王熙凤 黄运福 才学鹏 CHEN Ying;QIAO Jun;MENG Qingling;ZHONG Wenqiang;LIU Tianli;GONG Shasha;WANG Xifeng;HUANG Yunfu;CAI Xuepeng

作者机构：石河子大学动物科技学院新疆石河子832003 中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃兰州730046 

基　　金：兵团国家科技合作计划(2016AH006) 国家国际科技合作交流项目(CK07-11) 家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放课题(SKLVEB2016KFKT008) 

出 版 物：《畜牧与兽医》 (Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2018年第50卷第3期

页      码：63-67页

摘      要：为研究细粒棘球蚴（Echinococcus granulosus,Eg）中的原头蚴特异性抗原Eg19蛋白的反应原性,根据Gen Bank中Eg19抗原基因c DNA序列设计特异性引物,以Eg头节总RNA为模板,进行RT-PCR扩增,将PCR产物克隆到p MD19-T载体,测序验证后,将Eg19抗原基因亚克隆至表达载体p ET-32a中,构建p ET-Eg19原核表达载体,将其转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中,用IPTG进行诱导表达,并对表达的蛋白进行纯化及反应原性分析。结果 Eg19 c DNA全长534个核苷酸,编码177个氨基酸,等电点为4.54。该多肽含有2个N端酰基化位点,1个PKC磷酸化位点,1个CKⅡ磷酸化位点,1个ATP/GTP结合位点基序A（P-loop）;抗原表位区集中在20~93、96~146位;为亲水性蛋白。SDS-PAGE可以检测到35 k Da的蛋白特异性条带;Western blot结果显示,表达的重组蛋白Eg19抗原能与Eg阳性血清发生特异性反应,具有较强的反应原性,为进一步利用Eg19抗原蛋白作为Eg感染诊断中的候选抗原奠定了前期基础。

主 题 词：细粒棘球蚴 Eg19抗原基因 克隆 表达 反应原性 

学科分类：07[理学] 0713[0713] 

馆 藏 号：203284602...