新城疫病毒F蛋白的原核表达及鉴定

作     者：王玲玲 吴胜昔 曾政 梁望旺 蒋棚俊 顾盼 周康森 

作者机构：重庆理工大学药学与生物工程学院重庆400054 重庆市动物疫病预防控制中心重庆401120 

基　　金：重庆高校优秀成果转化项目(KJZH14212) 重庆市社会民生科技创新专项(cstc2015shmszx80027 cstc2016shmszx0076) 重庆市巴南区科技计划项目(2017TJ06) 

出 版 物：《黑龙江畜牧兽医》 (Heilongjiang Animal Science And veterinary Medicine)

年 卷 期：2018年第7期

页      码：116-119页

摘      要：为了实现新城疫病毒（NDV）-F蛋白在大肠杆菌中的高效表达,试验采用基因工程方法对NDV-F蛋白的原核表达进行研究,在不改变NDV-F蛋白氨基酸序列的情况下,以NDV-F全基因组为模板设计并合成引物,采用RT-PCR法扩增NDV-F基因,并将其克隆到原核表达载体p ET32a（＋）中,构建重组质粒pET32a（＋）/NDV-F,转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中进行诱导表达,利用His-tag镍柱纯化重组蛋白NDV-F,并对纯化后的重组蛋白进行鉴定。结果表明：重组菌株在16℃条件下,以0.1 mmol/L IPTG诱导20小时时,NDV-F重组蛋白表达量最高;经His-tag镍柱纯化后在78 ku处有明显的蛋白印迹条带,与预期大小相符。说明NDV-F重组蛋白在大肠杆菌中成功表达,且纯度较高,特异性较好。

主 题 词：新城疫病毒(NDV) F蛋白 原核表达 重组菌株 蛋白免疫印迹分析 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 090601[090601] 071010[071010] 081704[081704] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-轻工类] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2017.04.0127

馆 藏 号：203284636...