基于CRISPR/Cas9系统的HEK293T细胞DMD基因第51号外显子的靶向敲除

作     者：李双 马珊珊 崔思颖 屈素真 蔡奥捷 关方霞 孔祥东 LI Shuang;MA Shan-shan;CUI Si-ying;QU Su-zhen;CAI Ao-jie;GUAN Fang-xia;KONG Xiang-dong

作者机构：郑州大学第一附属医院遗传与产前诊断中心河南郑州450052 郑州大学生命科学学院河南郑州450001 

基　　金：2016年度河南省产学研合作项目(162107000017) 

出 版 物：《基础医学与临床》 (Basic and Clinical Medicine)

年 卷 期：2018年第38卷第3期

页      码：375-380页

摘      要：目的应用CRISPR/Cas9基因编辑技术,完成HEK293T细胞中DMD基因第51号外显子(exon51)高效的靶向敲除。方法设计靶向人DMD基因exon51 5 端及3 端的sgRNA并克隆至CRISPR/Cas9载体质粒PX459中,转染至HEK293T细胞后,提取基因组DNA并使用Surveyor法检测切割活性;使用目标外显子两端切割活性最高的sgRNA构建PX459-2sgRNA质粒,转染至HEK293T细胞后用PCR及T载体测序检测靶向外显子切除情况。结果50%的HEK293T细胞中DMD基因exon51被定向切除,编辑效率较高。结论建立使用CRISPR/Cas9单质粒敲除人DMD基因exon51的平台,为DMD及其他遗传病的基因治疗研究奠定实验基础。

主 题 词：CRISPR/Cas9 DMD基因 单载体质粒 HEK293T细胞 外显子敲除 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100204[100204] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1001-6325.2018.03.018

馆 藏 号：203284648...