泛素连接酶Cbl—b基因短发卡RNA慢病毒载体构建及其对A375细胞生物学行为的影响

作     者：王小坡 倪娜娜 熊竞舒 宋昊 姜祎群 陈浩 曾学思 孙建方 Wang Xiaopo;Ni Na'na;Xiong Jingshu;Song Hao;Jiang Yiqun;Chen Hao;Zeng Xuesi;Sun Jianfang

作者机构：中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所病理科南京210042 

基　　金：国家自然科学基金(81272992) 北京协和医学院研究生创新基金(2015-1002-01-12) 中国医学科学院医学创新基金(IFMS-2017-12M-1-017) 

出 版 物：《中华皮肤科杂志》 (Chinese Journal of Dermatology)

年 卷 期：2018年第51卷第3期

页      码：177-181页

摘      要：目的 构建人泛素连接酶Cbl-b基因短发卡RNA（shRNA）重组慢病毒载体，探讨其对人黑素瘤A375细胞生物学行为的影响。方法 设计并合成3条沉默Cbl-b 基因的特异性shRNA及1条阴性对照shRNA，构建慢病毒载体。将A375细胞分成5组，即分别用3条特异性shRNA转染的CBLB-shRNA-1组、CBLB-shRNA-2组、CBLB-shRNA-3组，阴性对照组（阴性对照shRNA转染），空白对照组（转染空载体）。应用实时荧光定量PCR和Western印迹检测转染后72 h各组A375细胞沉默效率；CCK8法检测转染后24、48、72及96 h细胞增殖能力；流式细胞仪检测转染后72 h细胞凋亡情况、细胞周期，Transwell法检测转染后72 h细胞侵袭能力。结果 成功构建3条Cbl-b shRNA慢病毒载体，Western印迹示CBLB-shRNA-3蛋白沉默效率最高。CCK8检测表明，CBLB-shRNA-3组A375细胞增殖能力在转染后72 h和96 h较阴性对照组、空白对照组明显降低（均P 〈 0.01）。流式细胞仪检测示，CBLB-shRNA-3组凋亡率［（22.73 ± 6.58）%］明显高于阴性对照组［（6.08 ± 1.35）%］和空白对照组［（6.34 ± 1.07）%，均P 〈 0.01］。CBLB-shRNA-3组G1期细胞比例明显高于阴性对照组和空白对照组（P 〈 0.01），而S期细胞比例明显低于阴性对照组和空白对照组（P 〈 0.01）。Transwell检测示，阴性对照组、空白对照组和CBLB-shRNA-3组转染后72 h时穿膜细胞数分别为76.60 ± 1.82、73.20 ± 3.83、19.60 ± 1.14，差异有统计学意义（F = 794.50，P 〈 0.01）。结论 成功构建能高效沉默Cbl-b蛋白的CBLB-shRNA-3重组shRNA慢病毒载体，其可促进A375细胞凋亡，抑制A375细胞增殖、细胞周期进程和侵袭能力。

主 题 词：黑素瘤 原癌基因蛋白质c—cbl RNA,小分子干扰 细胞增殖 细胞凋亡 细胞周期 基因,Cbl-b A375细胞 短发卡RNA 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2018.03.003

馆 藏 号：203284796...