C群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NhhA重组载体pASK-IBA37plus-nhhA的构建

作     者：刘艳超 李旭红 王明晓 崔萌 王海生 高玉敏 LIU Yan-chao;LI Xu-hong;WANG Ming-xiao;CUI Meng;WANG Hai-sheng;GAO Yu-min

作者机构：内蒙古医科大学公共卫生学院呼和浩特010110 石药集团中奇制药技术(石家庄)有限公司石家庄050035 内蒙古医科大学基础医学院呼和浩特010110 

基　　金：内蒙古自然基金(2015MS0828) 内蒙古医科大学"科技百万工程"资助重大项目(YKD2014KJBW004) 内蒙古医科大学中青年人才团队项目(NYTD-2015009)资助 内蒙古自治区留学人员科技活动项目(1410006) 

出 版 物：《科学技术与工程》 (Science Technology and Engineering)

年 卷 期：2018年第18卷第11期

页      码：31-36页

摘      要：构建C群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白Nhh A重组载体p ASK-IBA37plus-nhh A。以脑膜炎奈瑟菌C群菌株为实验材料,根据Gene Bank上的已知序列设计引物,通过聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增C群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白Nhh A基因(nhh A)。将nhh A与p ASK-IBA37 plus质粒用EcoRI,Xho I进行双酶切并尝试不同条件进行连接;连接产物实现在大肠杆菌TOP10感受态细胞中的转化。使用验证质粒图谱初筛和PCR与EcoRI,Xho I双酶切双重验证法复筛的方式筛选p ASKIBA37plus-nhh A阳性转化子。最后将构建好的p ASK-IBA37plus-nhh A进行基因测序。成功构建C群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白Nhh A重组载体p ASK-IBA37plus-nhh A,同时发现nhh A与p ASK-IBA37plus摩尔数之比为5.1、连接体系20μL、DNA终浓度为1.7 ng/μL时,获得的转化子阳性率能达到18.8%,且转化子菌落总数数量适中,方便后续筛检。同时,测序得到1 797 bp的nhh A序列信息,在Gen Bank上进行序列相似性比对,发现该基因与脑膜炎奈瑟菌NGH38的外膜蛋白GNA992(Neisseria meningitidis strain NGH38 outer membrane protein GNA992)基因的相似性为98%。

主 题 词：C群脑膜炎奈瑟菌 外膜蛋白NhhA nhhA 外源表达载体pASK-IBA37plus-nhhA 

学科分类：08[工学] 09[农学] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

馆 藏 号：203285146...