流产衣原体荧光定量PCR方法的建立及小鼠感染菌体载量测定

作     者：张志君 李兆才 娄忠子 周继章 ZHANG Zhi-jun;LI Zhao-cai;LOU Zhong-zi;ZHOU Ji-zhang

作者机构：中国农业科学院兰州兽医研究所兰州730046 

基　　金："十三五"国家重点研发计划(No.2016YFD0500907) 甘肃省科技支撑计划(No.1504NKCA054)联合资助~~ 

出 版 物：《中国人兽共患病学报》 (Chinese Journal of Zoonoses)

年 卷 期：2018年第34卷第3期

页      码：224-229页

摘      要：目的建立荧光定量PCR(qPCR)对流产衣原体的检测方法。在流产衣原体灭活疫苗的生产中,代替具有主观判断影响的涂片染色疫苗效价检测方法。方法根据流产衣原体富含半胱氨酸的胞质蛋白(envB)基因保守序列设计特异性引物,利用EnvB-PMD19T阳性质粒为参考标准品,优化了反应条件,进行了敏感性、特异性及重复性试验,检测了感染流产衣原体小鼠的菌体载量。结果以重组质粒为标准品建立的标准曲线在1×10~2 copies/μL^1×10~6 copies/μL内呈现良好的线性关系,扩增效率为97%。灵敏度试验表明,该检测方法的最低检出限低至10copies/μL。组内、组间重复性试验的变异系数均小于2%,具有良好的重复性和稳定性。消化道检测到的菌体载量高于腹腔注射的菌体载量。结论本研究建立的方法能够有效的检测小鼠相应脏器的菌体含量,为流产衣原体灭活疫苗的效检提供可靠的检测方法。

主 题 词：Balb/c小鼠 流产衣原体 实时荧光定量PCR 绿色荧光染料 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1002-2694.2018.00.023

馆 藏 号：203286890...