FKBP38的原核表达、抗体制备及其应用

作     者：刘安玲 赵莉 Ma Dong-zhu 贾春宏 李明 温芝华 叶永斌 LIU An-ling;ZHAO Li;Ma Dong-zhu;JIA Chun-hong;LI Ming;WEN Zhi-hua;YE Yong-bin

作者机构：南方医科大学基因工程研究所广东广州510515 南方医科大学细胞生物学教研室广东广州510515 Department of Pharmacology and Chemical Biology University of Pittsburgh School of Medicine Pittsburgh PA 15213 USA 

基　　金：国家自然科学基金(30771027 30870955 30900555) 

出 版 物：《南方医科大学学报》 (Journal of Southern Medical University)

年 卷 期：2010年第30卷第6期

页      码：1226-1229页

摘      要：目的构建人FKBP38 N-末端及C-末端原核表达载体并使其在大肠杆菌中高效表达,纯化基因表达产物,制备兔多克隆抗体并对该抗体用于Western免疫印迹、免疫荧光及免疫组织化学检测进行评价,为研究FKBP38的功能奠定基础。方法以人FKBP38 cDNA为模板,根据人FKBP38全长cDNA系列,设计PCR引物分别扩增N-末端(1-207aa)及C-末端(209-387aa),将扩增产物克隆至大肠杆菌表达载体pGEX-6P1中,经BamH I/Sal I双酶切鉴定。GST-FKBP38-N及GST-FKBP38-C融合蛋白在硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下在大肠杆菌BL21中得到表达。利用谷胱甘肽亲和层析纯化融合蛋白,用纯化的GST-FKBP38-N融合蛋白及GST-FKBP38-C融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体并进行纯化。使用纯化的抗FKBP38多抗以Western免疫印迹、免疫荧光及免疫组织化学检测FKBP38的表达与细胞内的定位。结果成功构建FKBP38 N-末端及C-末端原核表达载体,表达并纯化了GST-FKBP38-N融合蛋白及GST-FKBP38-C融合蛋白,制备并纯化了FKBP38特异性抗体。该抗体用于Western免疫印迹检测FKBP38在不同细胞株中的表达,特异性强、效价高;用于免疫荧光检测FKBP38在细胞内主要定位于线粒体上;用于免疫组织化学检测FKBP38在乳腺组织细胞呈现胞浆阳性。结论 FKBP38特异性抗体制备成功,该抗体可用于FKBP38的免疫印迹、免疫荧光及免疫组织化学检测,为深入研究FKBP38的功能奠定基础。

主 题 词：FKBP38 多克隆抗体 Western免疫印迹 免疫荧光 免疫组织化学 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.12122/j.issn.1673-4254.2010.06.003

馆 藏 号：203287333...