靶向Bak1的shRNA表达腺病毒构建及其对人骨肉瘤细胞的影响

作     者：黄红 柴爽 万雷 王吉利 黄宏兴 HUANG Hong;CHAI Shuang;WAN Lei

作者机构：广州中医药大学护理学院，广州 510006 广州中医药大学，广州 510405 广州中医药大学附属骨伤科医院，广州 510240 

基　　金：国家自然科学基金项目 编号81373653 国家自然科学基金项目 编号81674004 广东省科技计划项目 编号2016A020216024 

出 版 物：《江西医药》 (Jiangxi Medical Journal)

年 卷 期：2018年第53卷第4期

页      码：310-314页

摘      要：目的构建沉默人Bcl-2拮抗1基因(Bak1)的重组腺病毒,感染人成骨肉瘤细胞MG63并检测其对细胞活性的影响。方法设计特异性针对Bak1的sh RNA序列及无关对照序列scr,分别构建重组腺病毒表达载体,感染人成骨肉瘤细胞MG63,利用q PCR和Western blot检测Bak1基因沉默后的MG63细胞Bak1 m RNA及蛋白的表达,筛选出能高效沉默目标基因的重组腺病毒表达载体,并对其进行包装扩繁,荧光显微镜观察计算病毒滴度,利用MTT法检测高效沉默的重组腺病毒感染MG63细胞后的细胞活性。结果 (1)测序列结果表明,sh RNA序列已成功克隆入到p Ad-GFP载体上;(2)sh RNA-3的沉默效率最高,扩增纯化后腺病毒滴度达到7.7×108GFU/ml;(3)MTT检测显示与NC对照组相比,sh RNA-3组MG63细胞活性增强(P<0.5)。结论成功构建了沉默Bak1的重组腺病毒,为进一步研究Bak1的功能奠定了基础。

主 题 词：组织构建 Bcl-2拮抗1 基因沉默 人骨肉瘤细胞 细胞活性 

学科分类：0303[法学-社会学类] 03[法学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1006-2238.20l8.4.009

馆 藏 号：203287756...