尼罗罗非鱼补体3基因片段的原核表达及条件优化

作     者：牛金中 黄瑜 汤菊芬 鲁义善 汪志文 郑琦 蔡佳 简纪常 NIU Jin-zhong;HUANG Yu;TANG Ju-fen;LU Yi-shan;WANG Zhi-wen;ZHENG Qi;CAI Jia;JIAN Ji-chang

作者机构：广东海洋大学水产学院//广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088 

基　　金：国家自然科学基金(31572651) 

出 版 物：《广东海洋大学学报》 (Journal of Guangdong Ocean University)

年 卷 期：2018年第38卷第2期

页      码：80-84页

摘      要：【目的】补体3(Complement3,C3)在罗非鱼的抗病感染中有重要作用,研究C3基因判断原核表达及表达条件。【方法】根据NCBI中已公布罗非鱼补体C3的基因序列,选取C3基因片段,设计一对带有酶切位点的特异性引物,经连接、转化等后,使用限制性核酸内切酶EcoRI和XhoI对克隆成功的C3基因片段以及原核表达载体pGEX-4T进行双酶切,构建重组质粒pGEX-4T-C3,导入大肠杆菌进行原核表达,并优化表达条件,并对纯化目的蛋白进行Western Blot鉴定。【结果】C3基因片段的重组质粒pGEX-4T-C3构建成功。罗非鱼C3基因片段编码区长度为1 341 bp。获得的目的蛋白分子质量为75 ku,与预期结果相符。最佳诱导时间、浓度以及温度分别为4 h、0.2 mmol/L以及37℃;目的蛋白主要以包涵体的形似存在。重组蛋白可以与GST-Tag单克隆抗体特异性结合,说明成功获得罗非鱼C3片段的重组蛋白。

主 题 词：尼罗罗非鱼 补体3 原核表达 条件优化 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 071002[071002] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1673-9159.2018.02.011

馆 藏 号：203287853...