嗜热枯草芽孢杆菌普鲁兰酶基因的表达与重组酶的性质

作     者：韩鹏 周鹏 闫巧娟 杨绍青 江正强 HAN Peng;ZHOU Peng;YAN Qiao-Juan;YANG Shao-Qing;JIANG Zheng-Qiang

作者机构：中国农业大学食品科学与营养工程学院北京100083 中国农业大学工学院北京100083 

基　　金：国家863计划项目(No.2011AA100905) 新世纪优秀人才支持计划(No.NCET-08-0534) 

出 版 物：《微生物学通报》 (Microbiology China)

年 卷 期：2011年第38卷第12期

页      码：1755-1761页

摘      要：克隆嗜热枯草芽孢杆菌WY-34普鲁兰酶基因并在大肠杆菌中进行表达,对重组酶进行纯化和酶学性质研究,根据枯草芽孢杆菌的普鲁兰酶蛋白序列,设计PCR引物对WY-34的普鲁兰酶基因进行克隆及异源表达。对表达蛋白的最适pH、pH稳定性及最适温度、温度稳定性等特性进行研究,并测定重组普鲁兰酶的底物特异性。将普鲁兰酶基因pluA克隆及分析序列后,发现基因长度为2.2 kb,编码718个氨基酸,在大肠杆菌中异源表达。通过Ni-IDA亲和层析一步纯化得到比活力为93.2 U/mg的纯酶,SDS-PAGE和凝胶层析测定的分子量分别为76.2 kD和74.3 kD。酶学性质研究表明,该酶的最适温度为40°C,在温度不高于45°C条件下稳定;最适pH为6.0,同一温度下pH 6.0-9.0范围内处理30 min可以保持80%以上的酶活力,此酶对普鲁兰糖有很强的底物特异性。此重组普鲁兰酶的酶学性质表明此酶具有一定的工业化应用价值。

主 题 词：枯草芽孢杆菌 普鲁兰酶 酶学性质 基因表达 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 071010[071010] 07[理学] 

核心收录：

D　O　I：10.13344/j.microbiol.china.2011.12.015

馆 藏 号：203288093...