山羊痘病毒SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测方法的建立

作     者：姚俊 杨永军 彭海生 陈官国 段国军 鲁富有 李华春 YAO Jun;YANG Yong-jun;PENG Hai-sheng;CHEN Guan-guo;DUAN Guo-jun;LU Fu-you;LI Hua-chun

作者机构：云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224 云南省丽江市华坪县畜牧兽医站云南华坪674800 云南省普洱市动物疫病预防控制中心云南普洱665000 

基　　金：云南省科技厅农业科技创新工程项目(2008LA019) 

出 版 物：《动物医学进展》 (Progress In Veterinary Medicine)

年 卷 期：2012年第33卷第7期

页      码：32-39页

摘      要：为了建立一种灵敏、特异、快速的山羊痘病毒实时定量检测方法,根据山羊痘病毒(AY077835)gp006基因序列,应用Beacon Designer 7.7软件设计合成一对PCR引物。将被检测的目的 DNA片段克隆PEASY-T1质粒,制备重组质粒标准品,以期建立以质粒拷贝数为单位的标准曲线。通过反应条件的优化及引物浓度的筛选,建立了山羊痘病毒SYBR GreenⅠ实时定量PCR(real-time PCR)检测方法,最佳引物浓度为400nmol/L。组内重复试验和组间重复试验变异系数均低于2%,最低检测限为1×101 copies/μL,上机检测时间在1h以内。用该方法对2011年流行于云南华坪、景谷及2003年流行于云南宣威、寻甸和昆明的山羊痘临床组织样品进行定量检测,结果送检组织样品抽提DNA中病毒含量分别为1.03×105、5.30×103、1.51×104、4.74×103、7.20×104 copies/μL。结果表明,所建立的real-time PCR具有灵敏、特异、快速的特点,适合于山羊痘临床组织样品的定量检测。

主 题 词：山羊痘病毒 SYBRGreenⅠ 实时定量PCR 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 090601[090601] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 0906[农学-水产类] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1007-5038.2012.07.007

馆 藏 号：203288338...