毛竹EMF2类基因原核表达条件优化

作     者：齐飞艳 陈媛文 张颖 张春玲 高健 Qi Feiyan;Chen Yuanwen;Zhang Ying;Zhang Chunling;Gao Jian

作者机构：国际竹藤中心国家林业局竹藤科学与技术重点实验室北京100102 

基　　金：国家林业局948项目(2012-4-49) 国家十二五科技支撑课题2006BAD19B02共同资助 

出 版 物：《分子植物育种》 (Molecular Plant Breeding)

年 卷 期：2012年第10卷第4期

页      码：485-489页

摘      要：在对毛竹EMF2基因功能研究的过程中,需要制备其抗体用于蛋白表达的检测。由于PheEMF2原核表达量低,纯化到的蛋白量不利于抗体制备,所以本研究用正交设计的方法对PheEMF2原核表达诱导条件进行优化,提高其原核蛋白表达量。根据L25(56)正交设计表设计诱导时间、诱导温度、IPTG终浓度、菌液OD值四因素五水平的融合蛋白表达诱导条件。用凝胶图像光密度分析系统分析各诱导条件下融合蛋白的表达量,发现菌液OD值和诱导温度对蛋白表达量有显著影响,而IPTG终浓度和诱导时间对蛋白表达量影响不显著。根据正交设计的效应曲线和方差分析结果,选择在菌株生长值OD600为1.1时,加入IPTG至终浓度1.0mmol/L,放入25℃摇床中振荡8 h诱导融合蛋白表达,融合蛋白的表达量约提升了10倍,占细菌总蛋白量的21.4%。

主 题 词：毛竹(Phyllostachys edulis) EMF2 正交设计 原核表达 诱导蛋白 

学科分类：0907[农学-草药学] 08[工学] 0829[工学-安全科学与工程类] 09[农学] 

D　O　I：10.3969/mpb.010.000485

馆 藏 号：203288353...