SELEX法筛选宫颈癌前病变核酸适配子

作     者：李文慧 石大林 贾茹涵 杨静 张艳艳 陈卫 韩跃武 Wenhui Li, Dahn Shi, Ruhan Jia, Jing Yang, Yanyan Zhang, Wei Chen, and Yuewu Han

作者机构：兰州大学生物化学与分子生物学实验室甘肃兰州730000 

基　　金：国家自然科学基金(No.21272107) 甘肃科技支撑计划资助~~ 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2018年第34卷第5期

页      码：785-793页

摘      要：构建随机ssDNA文库,通过SELEX技术,以正常、炎性宫颈脱落细胞为反筛细胞,以上皮内低级别病变(CIN1)、上皮内高级别病变(CIN2、CIN3)和鳞状细胞癌脱落细胞为正筛细胞,经过12轮筛选特异性适配子高度富集得到宫颈癌前病变适配子库,经特异性、亲和力分析和细胞免疫荧光确立高特异性适配子CIN-Ap4可作为诊断宫颈癌前病变生物标志物,为宫颈癌前病变分子诊断奠定理论基础,提供新思路。利用Prime Premier 5.0设计构建了随机ssDNA文库并根据文库两端固定序列设计引物,对对称PCR和间接不对称PCR中的退火温度、循环数以及上、下游引物浓度比等条件进行优化,分析确定50μL反应体系中对称PCR的最佳反应条件为:最佳退火温度为49.5℃,最佳循环数为15个循环;间接不对称PCR的最佳反应条件为:50μL反应体系中上、下游引物浓度的最佳比例为80∶1,最佳循环数为35个循环。实验结果表明成功构建了寡核苷酸文库,在最适PCR条件下可获得理想的dsDNA和ssDNA,并具有良好的重复性,为顺利筛选适配子提供保证。

主 题 词：宫颈癌前病变 指数式富集的配体系统进化技术 生物标志物 PCR条件优化 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 0831[工学-公安技术类] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 100214[100214] 0836[0836] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13345/j.cjb.170405

馆 藏 号：203289125...