人微管蛋白辅助因子A基因shRNA表达质粒的构建及鉴定

作     者：逄海港 张鹏 宋尔霖 李新涛 马鑫 张旭 PANG Haigang;ZHANG Peng;SONG Erlin;LI Xintao;MA Xin;ZHANG Xu

作者机构：解放军总医院泌尿外科北京100853 

基　　金：卫生行业科研专项项目:泌尿系统重大疾病的防治研究(编号201002010) 国家重点基础研究发展计划(973计划)(编号2013CB530803) 

出 版 物：《临床泌尿外科杂志》 (Journal of Clinical Urology)

年 卷 期：2014年第29卷第6期

页      码：541-543页

摘      要：目的:构建针对微管蛋白辅助因子A(TBCA)基因的shRNA载体并进行鉴定。方法:针对人TBCA基因mRNA序列,设计合成编码shRNA的两条寡核苷酸链,经退火形成发卡寡核苷酸模板片段,经双酶切克隆至pSilencer2.0-U6-neo和pGCsi-U6-neo-GFP载体,进行酶切测序鉴定,脂质体转染后进行western blot测定。结果:酶切测序证实成功构建干扰质粒,脂质体转染786-0细胞系后24小时可见绿色荧光蛋白。Western blot证实TBCA表达量降低。结论:成功构建了针对TBCA基因shRNA表达载体,为下一步进行RNAi的相关研究奠定了基础。

主 题 词：微管蛋白辅助因子A shRNA 基因沉默 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.13201/j.issn.1001-1420.2014.06.027

馆 藏 号：203289156...