膀胱平滑肌细胞乙酰胆碱M_3受体干扰RNA慢病毒载体的构建

作     者：尚振华 贾春松 颜灏 王巨昆 王旭 崔波 王琦 欧彤文 Shang Zhenhua;Jia Chunsong;Yan Hao;Wang Jukun;Wang Xu;Cui Bo;Wang Qi;Ou Tongwen

作者机构：首都医科大学宣武医院泌尿外科北京100053 

基　　金：北京市教育委员会科技发展计划面上项目(KM201410025016) 

出 版 物：《首都医科大学学报》 (Journal of Capital Medical University)

年 卷 期：2018年第39卷第3期

页      码：398-403页

摘      要：目的构建膀胱平滑肌细胞(bladder smooth muscle cells,BSMCs)M_3型受体干扰RNA慢病毒载体。方法合成4条M_3受体干扰序列,构建GV118-sh-M_3慢病毒载体,测序验证序列。将GV118-sh-M_3慢病毒载体与质粒p Helper1.0、p Helper 2.0三个载体共转染293T细胞,收集病毒颗粒并用荧光法检测4组病毒滴度。体外原代培养BSMCs,4组GV118-sh-M_3慢病毒(KD1、KD2、KD3和KD4)转染BSMCs,观察绿色荧光蛋白表达并通过RT-PCR、Western blotting法检测各组干扰效率。结果成功构建4个GV118-sh-M_3慢病毒载体,测序结果符合设计序列。4组GV118-sh-M_3慢病毒滴度分别为2×10~8、6×10~8、5×10~8和5×10~8TU/m L。分别转染BSMCs后,KD1组绿色荧光蛋白表达量最高且干扰效率最高。结论成功包装并筛选了GV118-sh-M_3慢病毒载体,为后续进一步研究干扰M_3受体在神经源性膀胱中的作用奠定了基础。

主 题 词：神经源性膀胱 M3型乙酰胆碱受体 慢病毒载体 RNA干扰 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100210[100210] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1006-7795.2018.03.016

馆 藏 号：203289161...