慢病毒敲减质粒pLKO.1-hSRF的构建及鉴定

作     者：蔡艺煌 邓小玲 黄文霞 黄洁 纪晴 许铭炎 CAI Yihuang;DENG Xiaoling;HUANG Wenxia;HUANG Jie;JI Qing;XU Mingyan

作者机构：厦门医学院口腔系厦门医学院附属口腔医院福建厦门361002 厦门大学医学院基础部福建厦门361002 

基　　金：国家自然科学基金(81671001,81771079,207201) 福建省中青年骨干人才项目(2015-ZQN-ZD-35) 厦门医学院科研基金(K2015-06) 厦门市重大疾病联合攻关项目(3502Z20179051) 

出 版 物：《癌变．畸变．突变》 (Carcinogenesis,Teratogenesis & Mutagenesis)

年 卷 期：2018年第30卷第3期

页      码：234-238页

摘      要：目的:构建敲减人血清反应因子SRF基因的慢病毒质粒,为进一步研究SRF在口腔鳞状细胞癌中的作用提供工具。方法:利用Thermo Fisher公司RNAi网站设计出针对SRF基因特异性敲减的片段,然后通过对pLKO.1载体进行双酶切,胶回收纯化后,经T4连接酶将双酶切线性化载体与设计的目的片段进行连接,转化和质粒提取,采用双酶切以及测序的方法对重组质粒进行序列鉴定。利用293T细胞对构建正确的pLKO.1-hSRF质粒进行病毒包装后感染SAS口腔鳞癌细胞,经嘌呤霉素筛选获得稳定株,并通过Western blot和实时荧光定量PCR对稳定转染细胞株的敲减效率进行验证。结果:构建出的慢病毒敲减质粒pLKO.1-hSRF经测序和酶切鉴定均正确,感染该慢病毒质粒的SAS细胞后,其SRF蛋白表达量和mRNA水平与对照组相比均显著下降(P<0.01)。结论:慢病毒敲减质粒pLKO.1-hSRF构建成功,获得SRF低表达的SAS细胞株。

主 题 词：慢病毒载体 质粒构建 血清反应因子 口腔鳞癌细胞 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1004-616x.2018.03.014

馆 藏 号：203289803...