PRRSV、PCV2与CSFV多重SYBRGreenⅠ实时荧光PCR检测方法的建立与初步应用

作     者：高晓平 郑兰兰 于朋飞 韩志涛 陈红英 崔保安 魏战勇 GAO Xiao-ping;ZHENG Lan-lan;YU Peng-fei;HAN Zhi-tao;CHEN Hong-ying;CUI Bao-an;WEI Zhan-yong

作者机构：河南农业大学食品科学技术学院河南郑州450002 河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002 河南省动物性食品安全重点实验室河南郑州450002 

基　　金：河南省重大科技攻关资助项目(111100110300) 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2015年第35卷第9期

页      码：1409-1414,1428页

摘      要：旨在建立一种能快速、灵敏、同时检测出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)与猪瘟病毒(CSFV)3种病毒的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。参照GenBank中登录的相关基因序列,设计了3对引物分别用于扩增PRRSV ORF7基因、PCV2ORF2基因与CSFV 5′端保守序列的部分片段。将测序正确的3段基因片段分别克隆入pGEM-T Easy载体,转化大肠杆菌DH5α,经测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线和溶解曲线,并对其灵敏性、特异性和重复性进行验证。结果表明,PCV2、PRRSV与CSFV荧光定量PCR的标准曲线的Tm值分别为84.6、86.7、89.3℃,溶解曲线特异,灵敏度分别可达181、202、177拷贝/μL,是普通PCR检测方法的100倍。本试验建立的PRRSV、PCV2与CSFV的荧光定量PCR检测方法实现了3种病毒的同时检测,能够对PRRSV、PCV2、CSFV混合感染的临床病料进行快速诊断。

主 题 词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪圆环病毒2型 猪瘟病毒 SYBR GreenⅠ 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2015.09.03

馆 藏 号：203289816...